出生后早期暴露狄氏剂对小鼠海马神经发育的影响-卫生毒理学专业论文.docxVIP

出生后早期暴露狄氏剂对小鼠海马神经发育的影响 中文摘要 研究背景 狄氏剂属于有机氯杀虫剂，可以对中枢神经系统产生毒性作用。狄氏 剂曾经在我国广泛使用，虽然至今已被禁用多年，但由于是一种持久性有机污染 物，且有生物富集作用，在环境、食物和乳汁中仍然可检测狄氏剂残留。已有大 量研究表明狄氏剂具有生殖毒性及内分泌干扰作用，但是，对生命早期低剂量狄 氏剂短期暴露可能影响神经发育尚知之甚少。 研究目的 在出生后大脑发育关键期，用不同浓度的低剂量狄氏剂经腹腔注射给 仔鼠染毒，观察其一般发育状况，海马神经元形态并分区计数神经元数目；Western Blotting 检测小鼠哺乳期、青春期和成年期海马突触相关蛋白水平，以期探讨狄氏 剂神经发育毒性作用的细胞学机制。 研究方法 ICR 小鼠计划受孕，出生后每窝小鼠经调整为 10 只后，每窝随机分为 5 组，分别为高剂量（20.0μg/kg）、中剂量（2.0μg/kg）和低剂量（0.2μg/kg）三个 狄氏剂染毒组及二甲基亚砜（DMSO）溶剂对照组和生理盐水（NS）对照组。在 出生后第三天（PND3）进行腹腔注射（2μl/10g）染毒，隔天 1 次，连续 6 次。实 验期间观察小鼠的体重、全身绒毛、开眼时间等一般生长发育指标及可能出现的 体征。从 PND92 天开始，进行 6 天程序的 Morris 水迷宫实验测试小鼠的学习记忆 能力。于哺乳期（PND14）、青春期（PND36）和成年期（PND98）分别麻醉、心 脏灌注、分离脑组织。左半脑经多聚甲醛固定、梯度蔗糖脱水后，冰冻切片（20 μm）， –40℃保存，Thionin 染色观察细胞形态并计数 CA1 和 CA3 区神经元数量。右半脑 快速分离海马，–80℃保存，Western Blotting 检测海马突触前膜蛋白 Synapsin I 和 突触后膜蛋白 PSD95 水平。 结果 实验期间小鼠注射部位未出现炎性反应，各组小鼠的全身绒毛、活动、神 态等一般生长发育指标及体重增加未见异常。对成年期小鼠海马分区神经元计数 发现，高剂量组雌性小鼠海马 CA1 区、CA3 区神经元数目相对值在青春期就明显 减少，且持续至成年期；而高剂量组雄性小鼠 CA1 区、CA3 区神经元数目相对值 则是在成年期出现明显减少（P0.05）。Morris 水迷宫测试发现，随着训练天数的 增加，成年期各剂量组小鼠的登台潜伏期都明显缩短，但高剂量狄氏剂染毒组小 鼠第五天、第六天的登台潜伏期有所延长，在 24h 后探索实验中，高剂量雌性、 雄性小鼠穿越原目标平台位置的次数减少（与溶剂对照组比较，皆 P0.05）。对 突触标志蛋白的检测发现，高剂量组雌性小鼠海马 Synapsin I 蛋白水平在哺乳期即 明显下降，到青春期乃至成年期也未显示恢复；青春期雌性小鼠海马中 PSD95 蛋 白水平呈现剂量依赖性下降（rPND36=－0.822, P0.05），持续到成年期（rPND98=－ 0.743, P0.05）。 雄性小鼠各组间海马 Synapsin I 蛋白水平无明显差异，而高剂量 组海马 PSD95 蛋白水平在发育各阶段（哺乳期、青春期和成年期）均明显下降。 结论 出生后早期接触狄氏剂，会损害小鼠成年后的学习记忆能力，影响海马 CA3 区神经元的形态结果及细胞构筑，且导致 CA1 及 CA3 区神经元数目减少；学习记 忆能力的下降可能主要因为狄氏剂降低了小鼠海马突触蛋白的表达，进而影响突 触联系的建立及突触可塑性。提示早期短期接触低剂量狄氏剂可能通过持久性损 害海马突触联系的构建而影响学习记忆。 关键词 狄氏剂 海马神经元 突触蛋白 Effects of Postnatal Exposure to Dieldrin on Neurodevelopment of Hippocampus in Mice Abstract Background Dieldrin is an Organochlorine insecticide which belongs to the persistent organic pollutants, it can produce the damages to the central nervous system. Dieldrin was once widely used in China. Although it has been disabled for many years, there are still residues of dieldrin in the environment, food and milk because of its high toxicity and bioaccumulation. Numerous stu