发酵甜高粱秸秆酵母菌离子注入后稳定性的研究-发酵工程专业论文.docxVIP

一种离子发射仪，由中国科学研究院的余增亮等引入到生物育种中。在调节了离子柬 发射速度 、发射能量等参数后 ，制造出了可以应用到生物学中的离子注入诱变仪器。 首先余增亮等将离子注入应用到了植物育种中，得到了较理想的成果，继而离子注入 技术开始被应用到微生物育种中。 1.2. 1 离子注入技术在微生物育种中的应用 自离子柬从材料字引入到生物学领域以来 ，离子柬被广泛的应用到了生物育种的 各个方面。大到植物育种，小到组织细胞 ，原生质体的诱变都有应用。植物育种利用 离子注入技术比较早，取得的成果也较多 ，在水稻 ，小麦 ，甘草 ，苗稽等多种作物中 都取得了较好的突变效果 。其在微生物育种中的应用起步较晚，但是也取得了很多可 喜的成果。该研究主要集 中在诱变后存活曲线的绘制 、可能诱变机理的推断，同时对 菌种的选育研究也越来越多。如南京工业大学利用离子注入选育大肠杆菌，他 们的诱 变方法为 吸取 O. lml 菌液，均匀地涂布于空白培养l[[ L ，在无菌条件下室温风干备用 ， 将其放入靶室中进行连续式注入，其中靶室真空抽至 10→Pa，注入能量为 20keV 和 40keV ，剂itl为 S-2Sx l014ions/cm2，同时做空白试验。将经过 L离子注入的培·养Jll1 以及对照培养皿用 O.Sml 无菌7.K洗脱，涂布到固体培养基中，放到 37C 的培养箱中培 养 48 到 60 小时，计算话细胞数 ，作存活率统计 ，并进行观察。以诱变剂量为横坐标 ， 存活率为纵坐标进行存活曲线的绘制。郑州大学用离子柬诱变谷氨酷服转 J应酶选育高 产菌株:对透明质酸 、环糊精葡萄糖基转移酶进行离子束诱变选育高产菌等等。他们 的诱变方法与南京工业大学采用的方法大致相同。只是诱变 选育谷氨瞰j按转肢酶 高产 菌株的方法略有不同。他们诱变的是甩子 ，在制备完炮子悬浮液后没有用无菌风吹干 制备菌膜 ，而是直接对菌液进行诱 变 。这在诱变中很少见 。可能与抱子的特性有关， 文献中也没避一步介绍。 1.2. 2 离子注入技术在酵母育种中的应用 离子注入技术在酵母中的应用成果只在近几年的文献中才见报道 ，所做工作也是 集中在存活曲线的绘制和菌种的选宵。如河南农业大学的离子注入对苹果酒酵母菌 的影响\郑州 大学离子束生物工程重点实验室发表的酶酶活性酵母菌的离子束民变 选育和酶学性质初步研究 。新疆大学的离子注入剂挝与酒精酵母存活率关系研究 等等。在注入过程中所边的 注入能量一般在 10 40 K eV ; 束流为 Sl O mA; 真空度在 10年a 以上:温度在 3SC 以下，注入剂扯一般在 01016N+ion/cm2。 但是所有的利用离子注入技术诱变酵埠菌后的 一个共同问题就是难以获得稳定 边传的酵母菌株 。 1.3 微生物离子注入的特点 离子注入通过动量传递效应、质量沉淀效应、电荷交换效应 、遗传学效应 、以及 其它的使菌体内环境变化从而引起变异的综合作用之下引起变异。在离子注入过程 中，加速后的离子具有一定的静止质盐，注入生物体后可以使质挝、自 E:MJ并n电荷共同 作用于生物体。不同的质量数 、电荷数和能量又司 以根据需要进行不同的组合，这就 使得其对生物体的作用更加的复杂多样。而且离子注入与生物体相互作用存在一 个峰 值，在峰值范围内 ，注入离子与生物体的相互作用是局部的 、多重的和不易修复的。 因此，离子注入用于诱变育种有可能在损伤轻的情况下获得较高的突变率和较宽的突 变谱例。 离子注入虽然具有以上多个优点 ，但也存在着 一个很大的弊端 ，那就是离子注入 诱变后的茵株稳定性较 差。虽然正突变率 比较高，但是其回复突变也较快。 1.4 提高菌种稳定性的方法 1.4. 1 菌种稳定性 本试验在筛选较高产菌株后又重点对菌株的稳定性进行了研究。参考传统诱变技 术中的重复诱变可 以提高突变株的稳定性的特点 。我们通过以下两种方法来提 高突变 菌的稳定性。 1.4.2 离子束与紫外线复合诱变增加菌种稳定性 在研究离子注入的诱变机理过程中 ，通过对其突变谐·进行分析，发现突变谱中 85%为碱基颠换 ，且全部为 G : C T: A 颇换 ，只有 15%为转换。推测颠换的可能 机制为 : 离子注入→破坏细胞表面进入内部 → 剌激产生大革自由基 → 自由基氧化损伤 DNA → G 变成 8→ 轼→ 7 ，8→ 二M鸟嘿岭→ 8→ 氧→ 7 ，8→ 二组鸟 瞟岭与 A 配对导致 G: C → T : A 颠换[匀。 紫外线的诱变机理为 :紫外线诱变 可 引起 DNA 链的断裂 、DNA 分子 内部和1分子 间的交联、核酸与蛋白质的交联 、H密l庭水和作用以及形成啼陡 二聚休。其中胸腺啼睫 二聚体的形成是紫外线改变 DNA 分子结构及生物