儿童EB病毒感染与血清铁蛋白、CD163及CD25关系的临床分析-儿科学专业论文.docxVIP

特异性［12］。铁蛋白的检测方法已经从传统的酶免法、放免法发展到化学发光 法。目前大部分临床检验室采用酶联免疫吸附法检测血清铁蛋白水平，其检测 上限为 2000ug/L，而 HLH 患儿的血清铁蛋白远高于该水平，故有人指出提高 临床血清铁蛋白的检测上限有利于对 HLH 疾病的早期诊断及病情分析，因此， 本研究中应用最大范围可达 40000 ug/L 的化学发光免疫分析法检测血清铁蛋白 水平。 CD163 是一种仅仅在单核细胞-巨噬细胞系细胞膜上表达的跨膜糖蛋白分 子, 具有单核细胞-巨噬细胞特异性，可作为巨噬细胞活化的标记[16]。由 CD163 分子胞外段释放的 sCD163 也能产生抗炎，免疫作用。sCD163 是巨噬细胞活 化的重要标志物 [17]。HLH 中也存在大量巨噬细胞活化，因此，Jordan 等人提 出把血清 sCD163 的升高作为 HLH 的诊断指标之一[13]。 可溶性 IL-2 受体 alpha 链（sIL-2Ra,sCD25）主要来源于 Treg 细胞膜表面 CD25 的脱落［30］，是 T 淋巴细胞激活的指标之一［32］。sCD25 水平升高可见于 器官移植、排斥反应、病毒性和细菌性感染、恶性肿瘤、创伤和自身免疫病等［34]， 所以，HLH-2004 诊治指南中提出的 sCD25＞2400 U/ml，临床实践中这样的指 标也可常见于恶性疾病及感染性疾病，但若 sCD25 水平极高(＞10000pg/ml) 常 可提示 HLH，当 HLH 患者血清 sCD25＞20000pg /ml，常提示预后不佳［35］。 调节性 T 细胞（Treg cell）是一类以表达 IL-2 受体 alpha 链（CD25）为特 征具有免疫抑制或者调节能力的 CD4+T 细胞。有研究表明 Treg 细胞可通过穿 孔素途径和颗粒酶途径对活化的 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞、CD14+单核细胞 以及成熟/未成熟的树突状细胞发挥细胞毒作用［27］，而上述靶细胞的过度活化 是 HLH 免疫病理损伤过程的中心环节［28］。因此，有研究者推测 Treg 细胞在 HLH 的发病机制中起着一定的作用，但目前尚未得到研究证实［29］。 酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）是检测细 胞因子的经典方法，目前 sCD163 和 sCD25 水平的检测用于 HLH 的诊断仅限于 有一定实验条件的医院中。ELISA 技术一般要收集一定量的标本后再统一进行， 并且结果的获取也需要一定的时间，不利于 HLH 的及时诊断。相比 ELISA 而 言，流式细胞术具有操作简便、快速准确、所需样本量少的优点，目前已广泛 应用于临床。因此，本研究应用流式细胞术检测 EBV 感染患儿细胞膜表面 CD163、CD25 的表达，应用 ELISA 检测血清中相应 sCD163、sCD25 的水平， 分析膜形式和可溶性形式之间的关系，并探讨其与患儿临床表现、疗效及预后 之间关系。 目 的 检测不同感染状态下患儿细胞膜表面 CD163、CD25 的表达，血清铁蛋白、 sCD163、sCD25 的水平；分析 CD163、CD25 的膜形式和可溶性形式之间的关系； 探讨以上免疫活化指标与 HLH 患儿临床表现、疗效检测及预后评估之间的关系。 方 法 将研究对象分成一般感染组、重症感染组、IM 组和 HLH 组，检测各组血 清铁蛋白、CD163 和 CD25 的水平。 1 血清铁蛋白水平检测 1.1 标本采集： 所有患儿标本在入院时采集，干燥管收集外周静脉血 1ml，注意避免溶血。 1.2 分离血清：收集的血标本离心，3000rpm/min×15min，吸取上层血清，将血 清等分装于 ep 管中，放于-80℃冰箱保存，注意避免反复冻融。 1.3 检测血清铁蛋白：待收集一定血清标本后利用雅培公司的全自动化学发光免 疫分析仪检测血清铁蛋白水平。 2 单核细胞膜 CD163 和淋巴细胞亚群 CD25 的表达率检测 2.1 标本采集：所有患儿标本在入院时采集，EDTA 管收集外周静脉血 1ml。 2.2 细胞的荧光抗体标记 对照管：CD45-Percp/IGG1-FITC/ IGG1-PE/ IGG1-APC 单核细胞：CD45-Percp/CD14-FITC/CD163-PE 淋巴细胞亚群：CD45-Percp/CD19-FITC/CD25-APC CD45-Percp/CD3-PE/CD25-APC CD45-Percp/CD3-PE/CD4-FITC/CD25-APC CD45-Percp/CD3-PE/CD8-FITC/CD25-APC 2.3 流式细胞术分析单核细胞膜 CD163 和淋巴细胞亚群 CD25 的表