反左金丸抗肿瘤和抗转移的机制研究-中药学专业论文.docxVIP

Mechanism study of Retro-zuojin Pill on anti-tumor and anti-metastasis. A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Medicine By Qi Xiaoxiao Supervisor.Prof.Du Gangjun June,2015 摘 要 恶性肿瘤是危害人类健康最严重的疾病之一，在我国常见致死病因中已占居首 位。目前肿瘤治疗多采用化疗手段，但化疗有着自身的缺陷，如：毒副作用大、易产生 多药耐药等 ，因此，越来越多的人开始把目光重新投向传统的中医药疗法。左金丸源 于《丹溪心法》，由黄连和吴茱萸按6：1组成，有清肝泻火，降逆止呕功效，现代药理 研究表明左金丸对胃癌有较好的防治作用，但其应用缺乏依据。我们前期研究发现，黄 连和吴茱萸按1：6组成反左金丸在防治肿瘤中更有优势。本文从整体，分子和细胞三个 水平评价左金丸、反左金丸及在反左金丸基础上添加商陆和肉桂组成的加味复方抗肿瘤 的功效，为反左金丸用于肿瘤防治提供理论支持。 本课题体外实验采用 MTT 法检测不同浓度的左金丸、反左金丸及复方酒浸液对人 肺癌细胞（A549）增殖的影响；划痕实验观察三种药物对肿瘤细胞迁移能力的影响； AO 染色检测三种药物对饥饿状态下肿瘤细胞自噬的影响。体内实验采用 H22 肝癌小鼠皮下 移植模型、lewis 实验性肺癌转移小鼠模型和乌拉坦诱导的小鼠肺癌模型，评价左金丸、 反左金丸及加味复方药粉和水煎液对肿瘤的预防及治疗作用，通过对荷瘤小鼠的精神状 态、体温、生存率和自主活动的观察，评价药物对实验小鼠中医学体征的影响；通过肺 组织 HE 染色观察药物对肺癌小鼠肺癌组织病理学的影响，并检测实验小鼠血清中 APT、 AFu、GP-73、SOD、MDA 和 LDH 等含量的变化。另外，本文也通过蛋白印迹法，观 察受试药物对 Nanog、Oct3 肿瘤干细胞标记物表达的影响。 体外结果显示：左金丸、反左金丸和加味复方酒浸液都呈剂量相关性抑制 A549 肺 癌细胞增殖，其 IC50 分别为 47.3，39.1，32.6μg/ml；三者对细胞迁移都有抑制作用， 相同剂量下反左金丸和加味复方能更有效地抑制肿瘤细胞迁移。另外，反左金丸和加味 复方还能显著抑制肿瘤细胞饥饿状态下的自噬。 体内实验结果显示：反左金丸和加味复方均能抑制肿瘤生长和转移，预防肿瘤发生， 维持小鼠体温恒定，提高小鼠生存质量，降低血清中 APT、AFu、GP-73、MDA 和 LDH 水平，提高 SOD 含量，延长荷瘤小鼠存活时间。 病理结果显示：反左金丸水煎液能显著改善小鼠肺组织病理变化。 蛋白印迹结果显示：反左金丸和复方可以显著降低肺癌模型小鼠肺脏中的肿瘤干细 胞标记物 Nanog 和 Oct4 的表达。 综上所述，与左金丸比较，反左金丸和加味复方更能有效阻止肿瘤细胞生长和预防 小鼠肺癌发生，隐含肿瘤发生的病因更偏重于寒凝气郁，也提示临床肿瘤治疗原则应减 少寒凉药物用量。 关键词：左金丸，反左金丸，中药复方，血清指标，肿瘤治疗 ABSTRACT Malignant tumor, one of the most serious diseases threatening human life, has occupied the first place in the common cause of death in our country. At present, chemotherapy is the main method for cancer therapy, but it has indigenous defects, for instance,it has great toxicity, and multi-drug resistance is frequently occurred, etc. so, more and more people begin to look back on the traditional chinese medicine therapy, zuojin wan arise from “ ?Dan Brook Heart Law?”,and be composed by Berberine and Evodia by 6:1,it has the effect of Qinggan xiehuo and descending p