反应停治疗IBD不同实验模型的疗效观察及机制探讨-内科学专业论文.docxVIP

第一部分  反应停用于不同 IBO 的疗效观察及机制探讨 研究生王恒 导师:欧阳钦教授 摘要 目的 观察反应停治疗由 TNBS 或 Oxazolone 诱导的结肠炎的疗效，并探讨 其可能的作用机制。 材料与方法 两种结肠炎模型的诱导及处理: TNBS 模型第 0 天，每只大鼠经灌肠 给予 0.85ml 含 30mgTNBS 的 50%乙醇;第 21 天，再次灌肠给予 0.45ml 含 1伽归-rn S 的生理盐水。Oxazolone 模型;第 0 和 1 天，腹部皮肤剃毛(约 )8cm2 ) 每只大鼠腹部皮肤涂捺 O.3ml 含有 12mg Oxazolone 的 100%乙醇溶 液，第 7 天，灌肠给予 0.2ml 含有 6mg Oxazolone 的 50%乙醇溶液。将上 述制模成功的大鼠分为 3 组，每组 6 只，每组均从最后灌肠后 3 天开始经 管喂不同药物，对照组管喂橄榄泊;强的松组管喂强的松 (5mglkg.d);反应 停纽管喂反应停 (200mglkg.d) ，1 次/日，连续 7 肠炎症的评价指标包括 大体损伤评分和组织学损伤评分，采用免疫组化法测定结肠组织 NF-KB P65 的表达;采用原位杂交法测定 ηW-αmRNA 的表达;采用 ELISA 法测定 结肠组织 TNF- Q 、IL-4、IFN- y 的浓度。 结果 1. TNBS 模型: l.l 治疗实验结束时，对照组、强的松组、反应停组的大体损伤评分 分别为 6.33 士1.03、16.7士 0.82、2.00 土 0.89;组织学评分分别为 7.33 +1.03、 2.67 + 0.82 、3.17 士 0.75 0 可见强的松组和反应停组明显小子对照组 (pO.OOI) ，而强的松组和反应停组间无明显差异(p0.05) ，说明反应停能有 效减轻 TNBS 诱导的结肠炎症。 1.2 NF-KB P65 和 TNF- Q mRNA 在三组中的表达分别为 62.45 土 12.38、23.62 士 8.54、34.18 士 9.65 和 12.42土 4.63 、9.86 士 3.29、4.35 士1.740 可见反应停组 NF-KB P65 和 TNF- Q mRNA 的表达明显减少，而强的松组 NF-KB P65 的表达明显减少，但 η吼叫阳的表达改变不明显。提示反 应停可能通过降低 NF-KB 的活化及促进 TNFαmRNA 的降解来减轻结肠 炎症反应。 1.3 TNF- Q 、IL-4 、IFN- y 在三组中的浓度分别为 540.32土 80.76、 94.58 士 14.45、486.18 士 68.47; 396.53士 92.42、78.45土 12.69、 347.56 士 82.94; 385.68 士 88.57、123.68土 38.15 、378.27 土 90.650 说明 TNBS 模 型以 η11 型细胞因子 TNF-α 、IFN- y 增高为主，而 Th2 型细胞因子 IL-4 未见增高;反应停能明显降低 TNF-Q 、IFN-Y 的量，增加 IL-4 的浓度，说 明反应停能促使 Thl 型细胞因子向 Th2 型转化。 2. Oxazolone 模型: 2.1 治疗实验结束时，对照组、强的松组、反应停组的大体损伤评分 分别为 2.00 土 0.89、0.33 士 0.52、18.3士 0.75;组织学评分分别为 7.83 士1.47 、 3.33 士 0.82 、6.50 士1.22 。可见强的松组明显小于对照组和反应停组 (p0.01)，而反应停组和对照组间无明显差异(p0.05)，说明反应停并未减 轻 oxazolone 诱导的结肠炎症。 2.2 NF-KB P65 在三组中的表达分别为 28.59 土 21.76、2 1.72 土 19.58、 25.65+23.21 ，以胞浆表达为主，三组间无统计学差异。而 TNF- Q mRNA 在 三组中的表达极少。提示 oxazolone 诱导的结肠炎并未活化 Md，因而 由于反应停无作用靶点，故不能减轻结肠炎症。 2.3 TNF-α 、IL-4 、IFN- y 在三组中的浓度分别为 150.47土 50.25 、 185.28土 48.84 ，320.43 士 62.51; 143.62 士 62.74 、127.35 土 38.62 、 297.78 士 70.84; 146.53士 58.36、198.21土 51.55 、305.3 8士 78.270 说明 oxazolone 模型以 Th2 型细胞回子 IL-4 增高为主，而Th 1 型细胞因子 TNF- Q 、IFN Y 正常。 结论 TNBS 模型属