子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响..docVIP

子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养对小鼠胚胎早期发育的影响 ［ ］目的：采用子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养， 观察其对早期胚胎体外发育的影响。方法：对小鼠子宫内膜 上皮细胞进行分离、培养鉴定，然后与体外受精的小鼠胚胎 进行共培养，观察共培养对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊 胚期胚胎总细胞数的影响。结果：与无上皮细胞相比，共培 养明显促进了小鼠桑椹胚率，囊胚率，囊胚孵化率和胚胎总 细胞数。结论：子宫内膜上皮细胞能够促进小鼠胚胎的体外 发育，对早期胚胎的体外发育环境具有优化作用。 ［关键词］子宫内膜上皮细胞；共培养；体外受精；小鼠 Effectso fCocultureofMouseE mbryowithEndometri alEpithelialCellsonEarlyMouseEmbryon icDevelopment Abs tract：ObjectiveToo bservetheeffectsof cocultureofmouseem1epithelialcelIson lopmentinMouseendo ellswereisolatedan cocultureofmouseem 1epithelialcelIson lopmentinMouseendo ellswereisolatedan scoculturedwithmou dinvitro. Thepercen ge,blastocysthatch berofblastocystwer bryowithendometria earlyembryonicdeve metrialepithelialc dcultured,thenitwa seembryosfertilize tageofembryocleava ingandtotalcellnum eobserved.ResultsC oculturewithendometrialepithelialcel 1scouldpromotethef ormationofmousemor oculturewithendome ula （%and°/o, PKeyword : Endometrial epi the lialcells；Cocultur e； Invitrofertiliza tion；Mouse 早期胚胎发育是一个极其复杂的过程，受到多种因素的 影响。在生殖医学等多个领域，胚胎体外培养技术已得到很 大的提高，胚胎与体细胞共培养因其能够克服体外发育阻滞、 提高移植后胚胎着床率［1］等优势而成为一种有效的胚胎体 外培养途径。共培养的方法很多，其中以采用雌性生殖道细 胞的效果最佳［2,3］。为进一步研究体细胞对胚胎体外发育 环境的影响，本实验采用小鼠子宫内膜上皮细胞和早期胚胎 进行共培养，观察其对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及嚢胚期 胚胎总细胞数的影响。 1材料与方法 材料 实验动物：15只20 g的昆明雌性小鼠购于中国科学院遗 传与发育所实验动物中心。实验动物房光、暗周期均为12h， 饲养温度为24°C?2 6°C，自由采食饮水。 试剂:DMEM培养基；胎牛血清；孕马血清促性腺激素和 人绒毛膜促性腺激素（宁波激素制品厂）；兔抗人角蛋白多克 隆抗体；生物素标记的羊抗兔IgG和辣根过氧化物酶标记的 链霉亲和素（Zymed公司）；实验中其余所用化学药品和试剂 购自Sigma公司。 方法 小鼠子宫内膜上皮细胞的分离培养：根据Wegner [4]等 人报道的方法从小鼠子宫组织中分离上皮细胞。调整细胞密 度为5X105/ml，细胞以ml/孔接种于24孔培养板中，置入 37°C、95%湿度、5%C02培养箱中培养。次日下午每孔更换 ml新鲜培养液，以后隔天换液一次。在接种后第5飞天，细 胞完全生长汇合时，收集细胞进行冷冻保存。 细胞的免疫染色：复苏的上皮细胞直接接种于多聚赖氨 酸包被的盖玻片上，放入培养箱中培养。待细胞单层形成后 取出玻片，预冷的PBS漂洗，4%多聚甲醛室温下固定30min， 3%的H202孵育30min，10 %的正常羊血清封闭40min;加一 抗，4°C孵育过夜；添加生物素标记羊抗兔的IgG，室温下孵 育2h;添加辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素，室温下孵育 2h； DAB显色，苏木精复染，封片。阴性对照采用PBS代替 一抗，其它步骤相同。 小鼠体外受精及胚胎培养：昆明小鼠体外受精和卵裂所 用培养液分别为H TF和mKS0M[5],体外受精方法参见王敏 康[6]等人的报道。受精后体外培养24h，均等卵裂为2-细 胞者判定为受精卵。冷冻细胞复苏后接种于96孔培养板， 体外培养3d。共培养前用含%BSA的mKSOM培养基润洗细胞 两次，加入新鲜mKSOM培养基。在无上皮细胞单层的培养孔 中也同样加入新鲜mKSOM