重组人促卵泡激素促排卵药效学的研究.docVIP

重组人促卵泡激素促排卵药效学的研究 　　摘要：目的 通过观察重组人促卵泡激素对正常大鼠超排卵作用及对不排卵模型大鼠的排卵影响，研究rhFSH对大鼠的药效学作用。方法 ①超排卵实验，正常雌性大鼠发情后期开始皮下注射rhFSH，给药剂量15IU/kg/d，连续3d，发情前期给HCG10IU/只；②受孕实验，给药同上，发情前期给予HCG后将雌性大鼠与雄性大鼠合笼；③无排卵模型实验，幼年雌性SD大鼠注射外源雄激素制造不排卵模型，用rhFSH治疗15d。结果 rhFSH对正常大鼠的血清促性腺激素水平没有明显的抑制，rhFSH明显增加正常大鼠的黄体数和卵泡数目和受孕大鼠的胎鼠数（与正常组相比，P0.05）；可以改善无排卵模型大鼠的血清性激素水平，增加黄体数目和成熟卵泡（与模型组相比，P0.05）。结论 rhFSH对正常大鼠超排卵和无排卵大鼠卵泡发育有较好的促进作用。 　　关键词：排卵；大鼠；药效学 　　重组人促卵泡激素（Recombinant human follicle-stimulating hormone， rhFSH）是将带有重组后人促卵泡激素（hFSH）基因的质粒共转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO），经过培养表达生产的。它是目前人类辅助生殖技术中常用的药物。由于糖基化作用的原因，原核表达系统难以生产出rhFSH。迄今为止，全球仅有两家公司的rhFSH 药物上市。对于动物的rhFSH药效学研究没有系统的报道，我们根据其临床的主要适应症设计了三个实验对其药效学作用进行系统的研究。对于超排卵作用方面，通过超排卵实验和受孕实验两个实验来进行研究，对于无排卵作用方面，通过rhFSH对雄激素致无排卵大鼠模型的作用实验来进行研究。为重组人促卵泡激素的可靠药效学评价建立基础。 　　1材料与仪器 　　1.1实验动物 雌性SD大鼠，体重200～250g；雄性SD大鼠，体重250～300g；9日龄雌性SD大鼠；均由中山大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号为：SCXK（粤）2011-0029。 　　1.2药物与试剂 重组人促卵泡激素（rhFSH， Gonal-FR），生产厂家：默克雪兰诺有限公司，批号A0002920；0.9% 氯化钠注射液（NS），广东艾希德药业有限公司生产，生产批号：121027207；HCG，杭州动物药品厂， 批号12010；丙酸睾酮注射液，上海通用制药有限公司，批号111104；甲醛，广州化学试剂厂，生产批号规格：AR，500ml/瓶；水合氯醛，国药集团化学试剂有限公司，批号规格：250g/瓶；FSH、E2、LH、P、T激素检测化学发光试剂盒均为雅培贸易（上海）有限公司产品。 　　1.3主要仪器 光学显微镜成像系统：LEICA，DM5000B；全自动化学发光检测系统，Abbott雅培公司，型号：ARCHITECT i2000 sr；电子天平：METTLER TOLEDO，SB32000。 　　2实验方法 　　2.1促排卵实验 　　2.1.1超排卵试验 30只成年雌性SD大鼠按体重随机分为空白对照组、rhFSH组每组15只，各组大鼠体重分布相似。通过阴道涂片法确定雌性大鼠的发情周期。发情周期为5d，分为发情间期（2d），发情前期，发情期和发情后期。从发情后期开始给药，空白对照组皮下注射生理盐水（NS）1ml/kg/d，给药组皮下注射rhFSH 15IU/kg/d（根据临床推荐剂体表面积折算成大鼠的剂量），1次/d，连续注射3d，第4d（发情前期）皮下注射HCG10IU/只（有类似黄体生成素的作用，与FSH合用，可诱发排卵），第5d（发情期）上午对大鼠进行10%水合氯醛腹腔麻醉，腹腔静脉取血3ml，用于检测生化指标。处死后摘除卵巢，称重用Bouin氏液固定，常规脱水，包埋，石蜡切片，每隔6μm做连续切片，用于HE染色观察卵巢组织形态学指标。 　　2.1.2受孕实验 动物分组及给药方法同2.1.1，并于第4d（发情前期）皮下注射HCG10IU/只后，将雌性大鼠与健康成年雄性大鼠1：1合笼，次日观察交配数（以观察到有精子或有阴道栓的为判断标准），记录交配数，已交配的继续饲养12d后处死，分离子宫，记录受孕数，计算受孕率；分离受孕大鼠子宫，记录胚胎数，计算受孕胎鼠数。 　　2.2不排卵模型的治疗作用 　　2.2.1造摸 参照魏美娟，俞瑾方法，9d龄，其中16只由颈背部一次性皮下注射中性茶油0.05ml为正常对照组；剩余35只由颈背部一次性皮下注射丙酸睾酮1.25mg/只，为造模动物组。第70d龄阴道开口，连续阴道涂片两个动情周期。正常对照组动物连续阴道涂片应呈现典型动情周期（动情前期、动情期、动情后期、动情间期），将动情周期不典型者剔除；而造模动物组动物的阴道上皮细胞应