金线莲栽培中多菌灵残留动态及安全使用标准的研究.docVIP

金线莲栽培中多菌灵残留动态及安全使用标准的研究 　　[摘要]采用甲醇提取，液液分配净化，高效液相色谱分析多菌灵在金线莲根、茎、叶及栽培基质中的残留消解动态，并对其安全使用标准进行讨论。结果表明不同多菌灵添加浓度下的回收率为82.9%～95.7%，RSD为2.0%～6.3%，满足农药残留检测要求。田间试验分别采用推荐剂量（1.0 kg?hm-2）和1.5倍推荐剂量（1.5 kg?hm-2）进行处理，2年连续实验结果表明，多菌灵在金线莲栽培基质中的半衰期为7.01～8.51 d，在根中残留趋势为先升后降，半衰期为4.93～5.71 d，在茎和叶中的消解半衰期分别为3.58～4.27，3.50～3.91 d。若多菌灵在金线莲植株中的最高残留限量推荐值为0.5 mg?kg-1，每年以1.0 kg?hm-2的剂量喷施4次，最后一次施药和收获时间的安全间隔期可推荐为28 d。 　　[关键词]金线莲；多菌灵；消解动态；安全间隔期 　　金线莲又名金线兰、金丝草，为兰科开唇兰属多年生名贵中药材，具有清热凉血、除湿解毒等功效，用于治疗糖尿病、肾炎、急慢性肝炎等症，在民间享有“药王”的美称[1-2]。由于金线莲自然繁殖率低，对生态环境要求严格，适应性较差，加之人工过度采挖，使得野生资源锐减。近年来许多学者对金线莲人工栽培进行研究，在种苗培育、组培苗移栽、设施栽培等关键技术取得突破性进展[3-5]。金线莲种植期间，茎腐病和软腐病危害严重，种植者常采用多菌灵进行病害防治。多菌灵是一种广谱内吸性杀菌剂，但残效期较长，并且对动植物及人体有一定的危害，目前已有研究表明，多菌灵能够影响哺乳动物精母细胞的减数分裂[6]。目前已有关于多菌灵在大青叶、白术、人参以及浙麦冬等中药材降解残留动态的相关报道[7-10]，但多菌灵在金线莲上的残留动态还未见报道。本文研究多菌灵在金线莲根、茎、叶及栽培基质中的残留消解动态，并对其安全使用标准进行讨论，为多菌灵的合理使用及其生态安全性评价提供科学依据。 　　1材料与方法 　　1.1田间试验 　　本试验于2012年4―8月，2013年4―8月在浙江农林大学百草园和浙江文成黄坦镇进行。供试材料为金线莲Anoectochilus roxburghii，由浙江农林大学胡润淮教授鉴定。设施药剂量为1.0 kg?hm-2 （推荐剂量）和1.5 kg?hm-2 （1.5倍剂量）2个处理，50%多菌灵可湿性粉剂兑水后，用背负式手动喷雾器均匀喷洒。每个处理3次重复，每小区30 m2。结合金线莲生产实际，各处理小区实行四轮施药，第1轮以推荐剂量于移栽后10 d喷施，第2轮和第3轮分别于5月初和6月初以推荐剂量和1.5倍推荐剂量喷施，第4次施药距离收获大约30 d，以推荐剂量和1.5倍推荐剂量分别施药，按照《农药残留试验准则》于2 h，1，3，7，10，14，21，30 d进行采样和样品处理[11]。 　　1.2仪器与试剂 　　高效液相色谱仪（Waters 600），KQ-300超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），高速匀浆机（天津市泰斯特仪器有限公司），旋转蒸发仪（R-201），电热恒温鼓风干燥箱（DGG-9070A）等。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，50%多菌灵可湿性粉剂（四川国光农化有限公司），多菌灵对照品（农业部环境保护科研监测所提供，纯度99%），助滤剂545（硅藻土载体，国药集团化学试剂有限公司）。 　　1.3色谱条件 　　Waters 600高效液相色谱仪（Waters 2998 PAD），C18色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm）。流动相为甲醇-水 55∶45；流速1.0 mL?min-1，柱温25 ℃，波长281 nm，进样量20 μL。 　　1.4标准溶液的制备 　　以甲醇为溶剂，将已配制的质量浓度为100 mg?L-1的多菌灵母液分别稀释成60，20，5，1，0.5，0.05 mg?L-1的一系列标准工作溶液，采用高效液相色谱法测定，以外标法定量。 　　1.5样品的制备 　　1.5.1 栽培基质 参照魏厚道等[10]方法，称取金线莲栽培基质样品20 g，置于250 mL锥形瓶中，加入约1.0 g助滤剂、100 mL甲醇和0.2 mol?L-1的盐酸10 mL，超声提取1.5 h，抽滤，用50 mL甲醇洗涤残渣，合并滤液，经旋转蒸发仪减压浓缩至20 mL左右，加入0.2 mol?L-1的盐酸10，40 mL水，混匀，再加40 mL石油醚，震荡1 min，静置，弃去有机相，水相用1 mol?L-1的氢氧化钠调pH至7.0，再依次用40， 30， 20 mL二氯甲烷萃取，经无水硫酸钠脱水，合并滤液，加1 mL乙酸乙酯减压浓缩至近干，改用氮气吹干，甲醇定容至5 mL，待HPLC检测。