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高卢蜜环菌杂交菌株筛选初析 　　摘要：提出蜜环菌单孢亲本菌株及杂交菌株的筛选标准，从114个高卢蜜环菌菌株中选出15个欧洲、北美及中国的单孢亲本菌株，通过杂交，筛选出6个具有杂交优势的组合（A3E3、A3C??1、A3C3、A3C??4、A3C3和A??1C3）。?? 　　关键词：高卢蜜环菌；?A杂交；?A筛选?? 　　中图分类号：S567.903.51?ξ南妆晔堵耄?A 　　 　　蜜环菌[Armillaria (Fr.: Fr.) Staude]是非常独特的一类担子菌，在生活史中双核的异核体阶段极为暂短，主要以单核的双倍体渡过其营养生长阶段。蜜环菌同其它高等担子菌不同的是具有由营养菌丝形成的根状菌索（Rhizomorphs）。在天麻(Gastrogia elata Bl.)的生长过程中，蜜环菌菌索侵入天麻表层，而天麻在表层形成独特的防御体系，一方面限制蜜环菌的深入侵染，另一方面分解、吸收和转化其菌索，靠同化蜜环菌菌索而生长、发育[1]。在天麻栽培方面，关于蜜环菌的研究主要集中在蜜环菌的侵染行为、侵染方式和蜜环菌的培育方面，关于蜜环菌适宜种类的研究很少，蜜环菌的杂交选育目前基本处于空白状态[2]。高卢蜜环菌（A. gallica）菌索粗壮、发达，生长迅速，无寄生性，有利于天麻的栽培生产。国外近年来的研究结果也表明，高卢蜜环菌的共生效果相对要好一些[3-5]，因此，我们选取高卢蜜环菌作为杂交育种的种类，在蜜环菌菌株杂交筛选方面做了初步的探索。?? 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1?κ匝榫?株 　　共收集了114个菌株，其中分布于中国的65个菌株，是本课题组自己采集分离的（分别来自中国东北地区不同地方采集到的65个子实体），单孢分离按文献[6]的方法进行；欧洲的28个单倍体菌株由芬兰林业研究所KARI KORHONEN研究员惠赠；北美的21个单倍体菌株分别由美国IOWA大学HARRINGTON TC 教授和法国GUILLAUMIN JJ教授惠赠。?? 　　 　　1.2?ε嘌?基 　　2%麦芽粉培养基(MEA)：麦芽粉20 g，琼脂17 g，蒸馏水1 L，pH值自然。?? 　　1.3?Φケ短迩妆揪?株的筛选 　　114个菌株在2% MEA培养基上，23 ℃避光培养14~20 d。单倍体菌株仍然能够保持白色棉毛状气生菌落形态（图 1），而双倍体菌株逐步由白色棉毛状气生菌落褐化，变成扁平壳状，红褐色（图 2）。根据培养形态特征，按以下标准并结合地理分布最终选出合适的单核菌株用于杂交：(1)选择菌落纯白色、棉毛状、厚密的菌株，最大程度地保证菌株为单倍体；（2）选择菌丝生长速度快，经过5次以上继代培养无任何退化迹象的菌株；（3）选择能够产生单轴分枝菌索，主轴粗壮，数量适中的菌株。?? 　　 　　1.4?Φケ短寰?株的杂交 　　将选出的亲本菌株进行循环对峙培养，采用直径6.5 cm的培养皿，在2% MEA培养基上接种菌丝块（0.1 cm×0.1 cm，相距0.3 cm），23 ℃避光培养21~28 d。?? 　　1.5?υ咏凰?倍体组合的选择 　　根据菌落形态特征判断两个单核菌株的性亲和性，考虑到菌落的直径不超过5 cm，确定在直径为2.5 cm的圆周上检查菌索的数量。在亲和性交配反应的组合中，选择菌落表面红褐色、有光泽，仍产生单轴分枝的菌索，主轴粗壮、数量适中，菌索初呈现白色并逐步变成红色，菌索光亮的杂交组合。由于菌落形状、褐化分布不规则，因此，只能根据壳状菌落大小、褐化程度，定性地分成最好、好和一般3个等级。?? 　　 　　2 结果与分析 　　 　　2.1?Φケ短迩妆揪?株筛选 　　选出6个中国菌株，4个欧洲菌株，5个北美单倍体菌株为亲本菌株，15个菌株的信息见表 1，考虑商业需要，真实的菌株号省略，仅以代码表示。 　　 　　 　　2.2?Φケ短寰?株的杂交 　　将表1中的15个单倍体亲本菌株进行相互交配，交配反应的结果见表 2。蜜环菌对峙培养的结果较为复杂，根据两个单核菌落形态和交界处的形态，本实验的交配反应分为以下几个类型：（1）亲和性的互交可育反应：菌落相互融合，逐渐变成红褐色壳皮状的双倍体；（2）互交不育反应：2个菌落相互融合，但菌落不变颜色，仍保持单倍体菌落的特征或者2个菌落互不融合，菌落之间有一定的隔离区域，但没有拮抗黑线出现；（3）有黑色拮抗线的互交不育反应：两个菌落互不融合，菌落之间有一定的隔离区域，具有明显的拮抗黑线，反应强烈时经常出现一方被另一方抑制生长或被杀死的现象；（4）不明显或无法判断的反应：反应现象不明显，无法判断出为何种类型。 　　 　　15个单核材料共进行了120组对峙培养试验，其中15组为自交实验，有效组合为105组，呈现亲和性交配