防御素基因克隆及其表达载体构建-预防兽医学专业论文.docxVIP

防梅素基坦克隆及其表达载体构建 硕士学位论文 摘要 ‘ 人防御索是一类广谱抗菌阳离子小肤的总称，)般具有 3-4个分子内二硫键。防御 萦对于细菌、真黯乃至某些被膜病毒杳广谱杀伤作用，是免疫系统中的重要组分。本实 验根据己发表的 HNP斗 cDNA 序列，设计并合成了一对引物。以 HL-60 细胞总协认为 模板，利用 RT-PCR 技术扩增自的片段并克隆到 pUC18 载体上，经筛选获得阳性意组 子 pUC18-HNP斗(pDFSl)o 测序分析证实，扩增片段即为 HNP-lcDNAo pDFSl 再经 SmaI 与 SalI酶切、插入pG EX-6p斗质粒构建阳、W-l 表达载体。利用 PCR 技术和酶切反应筛 选转化子最终获得 pGEX-6p- l-HNP-l(pDFS2)重组质粒。 HNP斗的克隆以及表达载体的 构建为进一步研究其表达奠定了基础。 关键词: 人防御索 RT-PCR 克黯 表达载体 .. . 2 硕士学位论文 凌华 东北农业大学 The Cloning ofHuman Neutropbil Defensin-lσINP-l) Gene and Construction of Its Expression Vector Abstract Defensins， a family of small cationic peptide wi伯伯ree to fo町 intramolecular cysteine disulfide bonds，have a broad spec町um of antimicrobial activity against bacteriaL fungiand even sorne enveloped viruses. As multifunctional effector molecules of innate immunity， defensins aJ它由e key ∞mponen也 in itnnlune system. In this report，a pair of p而ners were designed and synthesized according to published HNP-l cDNA nucleotide sequence. Totat HL-60 cells RNA was ísolated 企om cultured HL-60 cells.ηlen 由e t缸get 企agment was amplified by RT-PCR and cloned into pUC 18 vecωr between two restriction enzyme sites(B缸世! 1 and Xal 1).η\e 臼quence analysis showed the cloned 仕agrnent was HNP-l cDNA. Furthennore，the recombinant was digested by Sma 1 and Sal 1 and inserted into pGEX-6p- 1 expression vector. After screening by PCR aJld res创ction anaJysisi，we concluded HNP-l expression vector was constructed.ηle achievement of 也is study established 吐le foundation for 也e further research on expressing HNP-l. Post伊duate: Hua Ling M乓jor: Microbiology and Immunology Tutor: Prof. Jingpeng Li Key words: Human Neutroph ì1 Defensin-l(HNP-l)，RT-PCR， clone，expressìon vecωE . . 3 防御素基因克隆及其表达载体构建 硕士学位论文 前言 ‘ 对大多数动物而言，要在一个充满各种微生物的世界中生存，必须有完备的防御体 系。哺乳动物的免疫系统，就是逐渐分化而来的这样一个体系，它包括特异性免疫和非 特异性免疫 。非特异性免疫，对各种侵入机体内的微生物，在最初反应中极为关键。其 中，吞噬细胞又起主要作用，它消灭迹入机体 95%的微生物。吞噬细胞中，绝大多数是 嗜中性粒细胞，亦称多形核白细胞 (}MNs) ，它有两种防御活性，产生细胞毒性氧化衍 生物及一氧化氮的酶和具有直接