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丹参酮ⅡA磺酸钠在低氧所致肺动脉高压作用机制的研究-内科学(呼吸系病)专业论文
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注:保密的学位论文在解密后适用本声明。 研究生签名: 日期: 年 月 日 导师签名: 日期: 年 月 日
汕头大学医学院硕士学位论文
丹参酮 IIA 磺酸钠在低氧所致肺动脉高压作用机制的研究
硕士研究生:黄海乐 指导教师:李静
摘 要
背景:
肺动脉高压(PH)是以肺血管壁增厚、重塑为主要特征的肺血管疾病,大部分慢性阻 塞性肺疾病(COPD)患者因形成慢性低氧性肺动脉高压(CHPH),最终发展成为慢性肺源性 心脏病而死亡。研究表明,细胞内 Ca2+水平的变化在肺血管平滑肌细胞的收缩、增生的复 杂机制内起着至关重要的作用。目前研究发现低氧时钙池操纵性钙通道(SOCC)上调是引 起平滑肌细胞内钙离子失衡的主要原因,SOCC 主要由 Orai 蛋白家族组成,SOCC 的激活依 赖于内质网上钙离子感受器基质相互作用分子(STIM)的作用,慢性低氧能选择性地引起 STIM1、Orai1 表达升高,参与了肺动脉高压的疾病进程。丹参酮ⅡA 磺酸钠(STS)是中 药丹参的有效成分丹参酮ⅡA 在经过磺酸化后得到的水溶性产物,最近有研究发现,该药 对低氧性肺动脉高压具有保护作用,包括降低平均动脉压力、改善肺动脉平滑肌增厚程度 和右心室肥厚,但是其具体机制尚不清楚。
目的和意义:
建立肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)缺氧模型和 CHPH 动物模型,观察低氧情况及 STS 干预处理下细胞内 STIM1、Orai1、Ca2+水平、SOCE 的影响,CHPH 模型血流动力学变化,探 讨 STS 对 CHPH 的治疗效果及潜在的作用机制,为寻找有效防治慢性低氧性肺动脉高压的 方法打下坚实的理论基础。
研究方法:
本研究采用原代细胞和动物实验培养相结合的方法:(1)分离培养 PASMCs,建立缺氧 模型,免疫印迹法检测不同处理组 PASMCs 细胞中 STIM1、Orai1 蛋白表达的变化,InCyte 细 胞内钙浓度检测系统检测 PASMCs 基础[Ca2+]水平和 SOCE。(2)建立 CHPH 的大鼠动物模型, 检测各组大鼠的右心室平均动脉压(mRVP)、收缩压(RVSP)及血红细胞压积(HCT);观
I
察大鼠肺小动脉血管形态的组织学变化;称量计算右心室肥厚指数[RV/(LV+S)]、体重指
数(RV/BW)。 研究结果: 一、体外实验结果:
1、成功建立大鼠远端 PASMCs 原代培养模型。
2、持续低氧使大鼠远端 PASMCs 的 STIM1、Orai1 蛋白表达和细胞内的 [Ca2+]i 和 SOCE 升高。
3、STS 可显著抑制持续低氧诱导大鼠 PASMCs 中 STIM1 和 Orai1 蛋白上调,降低基础 [Ca2+]i 和 SOCE。
二、体内实验结果:
1、成功建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠动物模型。慢性低氧 3 周能够显著增加大鼠 的 mRVP、RVSP、 [RV/(LV+S)]、RV/BW、HCT 值,使远端肺动脉血管壁明显增厚、管腔狭 窄。
2、STS 干预可明显降低慢性低氧大鼠 mPAP、RVSP、RV/ (LV+S)、RV/BW、HCT 及远端 肺动脉血管壁厚度。
主要结论:
1、持续低氧能够上调大鼠远端肺动脉平滑肌细胞中 STIM1、Orai1 的表达,增加 SOCC 介导的 Ca2+内流,引起细胞内钙离子浓度升高。
2、STS 通过抑制低氧对大鼠远端肺动脉平滑肌细胞内的 STIM1、Orai1 蛋白表达的上 调作用,减少 SOCC 介导的 Ca2+内流,降低细胞内钙离子浓度。
3、慢性持续性低氧能够引起大鼠远端肺动脉平滑肌增厚,增加肺动脉压力,引起右心 肥厚。
4、STS 干预能够改善慢性低氧性肺动脉高压大鼠的血流动力学和心肺病理变化。
关键字:慢性低氧性肺动脉高压(CHPH);肺动脉平滑肌细胞(PASMCs);丹参酮ⅡA 磺酸 钠(STS);钙池操纵性钙通道(SOCC);基质相互作用分子(STIM);Orai1
II
The mechanism of Sodium Tanshinone IIA Sulfonate in the
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