依那普利拉抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的实验分析.pdfVIP

·论文· 依那普利拉抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞 增殖的实验研究 刖吾 瘢痕疙瘩(keloid)是皮肤损伤如创伤。烧伤或手术后引发的以成纤维细胞过 度增生和细胞外基质的异常积聚为特征的皮肤胶原性疾病，是一种创伤后病理愈 合状态，近年来对其发病机制的研究增多，国内外许多学者对瘢痕疙瘩的发生已 从组织学，病理学，生理学，免疫学和遗传学等方面进行了一系列的研究，多项 实验研究证实，成纤维细胞凋亡减少继而细胞增殖过度，分泌过多的胶原和细胞 外基质是导致病瘢痕疙瘩发生的重要机制。近年来有研究表明血管紧张素转换酶 inhibitors，ACEI)有抑制成纤维细胞增殖 抑制剂(angiotensinconveaingenzyme 和胶原蛋白的合成和分泌的功能。口服及局部应用ACEI类药物有显著改善瘢痕疙 瘩的作用。为探讨其作用机制，本实验采取瘢痕疙瘩成纤维细胞培养的方法，观察 不同浓度的依那普利拉对培养的第3～6代瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响。 材料与方法 一、标本 取女性瘢痕疙瘩患者胸前的病变组织。要求条件为，瘢痕疙瘩处于增生活跃期， 患者无结缔组织疾病或可能影响结缔组织代谢的疾病，无心、肺、肝、肾等慢性疾 病，3个月内未使用类固醇激素类药物、青霉胺、抗肿瘤药物等，且未曾接受放疗者。 二、实验材料 RPMll640培养液 500ml Hyclone公司 二甲基亚砜 100ml sigma 四甲基偶氮唑盐(MTT) 5mg sigma 胰蛋白酶 100mlHyclone公司 6 胎牛血清 100ml Hyclone公司 链霉素 100ml sigma 青霉素 100ml sigma SP试剂盒 福州迈新生物技术开发有限公司 鼠抗人P27bPl单克隆抗体福州迈新生物技术开发有限公司 三、实验仪器 超净工作台 国产 C02细胞培养箱 Heraeus，德[]；Sanyo，只本 高速低温离心机 Fiofuge，美国 低温离心机 Hitaehi，日本 550型酶标仪 Bio．RadLaboratoriesInc，Hercules，CA 光学显微镜 R本OlymPus Low 深低温冰箱 同本SANYO，Altra 蒸汽高压消毒箱 美国Tuttnaner，2540MK 倒置相差显微镜 OlymPuslMF--2同本 电热恒温水箱 国产，TDW．2002型 电热恒温干燥箱 天津市泰斯特仪器公司，DH3600A型 细胞离心机 美[]shandon，Cytospin2 四、实验方法 l、瘢痕疙瘩成纤维细胞原代培养 实验组织取自临床手术切除标本，把组织块置于培养皿内，PBS液漂洗三遍后 吸净PBS液，眼科剪反复剪切组织块成0．5mm3大小。将皮肤小块浸入含10％小牛 血清的RPMI1640培养液中，置于5％C02，培养箱培养。7d后见组织块边缘附有“絮