膈神经端侧吻合迷走神经重建高位颈髓损伤后呼吸功能的分析-外科学(骨科)专业论文.docxVIP

膈神经端侧吻合迷走神经重建高位颈髓损伤后呼吸功能的研究 膈神经端侧吻合迷走神经重建高位颈髓损伤后呼吸功能的研究 第二军医大学博士学位论文 第二军医大学博士学位论文 - - PAGE 13 - - - PAGE 10 - 摘 要 目的： 一、为膈神经端侧吻合迷走神经重建高位颈髓损伤患者呼吸功能提供人体解剖依 据 二、采用免疫组织化学方法研究人体膈神经及迷走神经各段的运动纤维数量。 三、寻找膈神经端侧吻合迷走神经的最佳位置，及最佳手术入路。 四、建立膈神经端侧吻合迷走神经重建高位颈髓损伤大鼠呼吸功能的实验模型。 五、监测膈神经端侧吻合迷走神经后大鼠颈髓横断前后的血气分析变化。 六、利用 B 型超声监测膈神经端侧吻合迷走神经后高位颈髓损伤大鼠膈肌活动度 的变化 七、探讨膈神经端侧吻合迷走神经后高位颈髓损伤大鼠膈肌肌电图的变化特点。 八、利用辣根过氧化物酶示踪技术探寻膈神经端侧吻合迷走神经后高位颈髓损伤 大鼠膈神经与中枢神经系统的联系。 通过本实验探讨膈神经端侧吻合迷走神经重建高位颈髓损伤大鼠呼吸功能的可 行性。为临床重建高位颈髓损伤患者的呼吸功能探讨新方法，提供理论指导。 方法： 一、选取 20 具（38 侧，2 侧标本损坏）福尔马林固定的成人标本，解剖并观察 迷走神经、膈神经的走形特点，测量迷走颈部及胸部的神经、膈神经的长度、宽度及 厚度，及其相互关系。 二、选取膈神经及迷走神经神经各特定位置的标本，采用免疫组织化学链霉菌抗 生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法对迷走神经与膈神经染色，进行神经纤维形态 学观察，并对胆碱乙酰移换酶单克隆抗体（choline acetylase, CHAT）以及神经纤 维单克隆抗体（Neurofilament）阳性表达的神经纤维应用 PV-9000 病理图文分析系 统进行定量分析。 三、动物模型建立： 每组实验选取健康雄性 SD 大鼠 15 只（购于中科院上海研究所），体重 180～200g。 随机分为 A、B、C 三组，每组 5 只。A 组为膈神经端侧吻合迷走神经组，B 组为膈神 经原位吻合组，C 组为空白对照组。将A组5 只大鼠腹腔麻醉后，钝性分离迷走神经 及膈神经干。将存在副膈神经的大鼠剔除，于颈 6 水平游离膈神经，锐性切断。将膈 神经远侧断端用 11-0 医用无损伤针线端侧吻合至迷走神经。同法进行对侧手术。将 B 组大鼠腹腔麻醉后，暴露膈神经干，将存在副膈神经的大鼠剔除，于颈 6 水平游离 膈神经，锐性切断。然后用 11-0 医用无损伤针线将离断膈神经重新吻合。同法进行 对侧手术。将 C 组大鼠应行腹腔麻醉后，仰卧位固定于动物手术台。10%硫化钠脱毛， 消毒手术野后铺巾。取锁骨下切口暴露膈神经，不行任何操作，撒青霉素粉剂后关闭 手术切口，术后不作任何外固定，任其自由活动。进行脊髓横断实验时，将上诉大鼠 饲养 10 个月后，于 C3/4 水平横断脊髓。进行各项指标测量。 四、术后 10 个月，将 A、B 各组大鼠麻醉后，仰卧位固定于动物手术台上。暴 露膈肌及双侧迷走神经吻合段。用双极电极作为刺激电极置于神经吻合口的近、远端 2mm 处进行刺激，同芯针电极为记录电极，插入膈肌的五个不同测量部位，对膈神经 对膈肌的重新支配情况进行全面的评估。分别记录波幅及传导速度，信号经放大后打 印记录以备后续分析。将五只大鼠的 5 个位置的神经传导速度、潜伏期及波幅的平均 值作为测量结果。C 组大鼠选择与 B 组吻合口相同的位置作为刺激电极置入的位置， 记录电极的位置与 A、B 组相同。同种方法测量对侧。完成上述测量后，将 A、B、C 三组大鼠取颈后正中切口，切除颈 3 全椎板并于颈 3、4 水平锐性横断脊髓。同法测 量三组大鼠波幅及神经传导速度的变化，与颈髓横断前测量结果相对比。 五、饲养 10 个月后，分别将A、B、C各组大鼠行腹腔麻醉，仰卧位固定于动物 手术台。取腹正中切口，显露腹主动脉，顺血流方向插入肝素化的特制软硅胶管，分 别抽取动脉血各 0.2ml，进行pH值、氧分压(Po2 )、二氧化碳分压(Pco2 )及血氧饱和度 (SO2 )的监测。然后取颈后正中切口，切除颈 3 全椎板并于颈 3 水平锐性横断脊髓。 在颈 3、4 脊髓横断后 1h、2h、3h、4h抽取动脉血进行pH值、氧分压(Po2)、二氧化 碳分压(Pco2)及血氧饱和度(SO2)的监测。同时监测C组正常大鼠作为对照组，分析膈 神经端侧吻合迷走神经后后高位颈髓损伤大鼠血气分析指标的变化特点，以及正常值 维持时间。 六、术后 10 个月，将 A、B、C 三组大鼠腹腔麻醉后，将大鼠四肢向两侧牵引仰 卧位固定于动物手术台。我们选择 1、剑突下；2、肋前；3、肋中三点应用 B 型超生 寻找膈肌，录制三个周期的平静呼吸下膈肌动态图，将其超慢回放