改性氯甲基壳聚糖金属配合物树脂对磷酯键及肽键水解作用的研究-食品科学专业论文.docxVIP

改性氯甲基壳聚糖金属配合物树脂对磷酯键及肽键水解作用的研究 改性氯甲基壳聚糖金属配合物树脂对磷酯键及肽键水解作用的研究 万方数据 万方数据 改性氯甲基壳聚糖 金属配合物 树脂对磷酯键及肽键 水解作用的研究 摘 要 磷酯键及肽键的水解在食品加工、生物制药等领域具有重要的理论意义及应用价 值，设计合成具有高度稳定性及催化活性的人工模拟酶是未来催化研究工作的重要方 向。壳聚糖是地球上第二大可再生资源，享有“万能多糖”的美誉，其分子内含有大量 可被修饰的活性基团，可以通过化学改性制备各种功能材料。 本研究以负载 1, 4, 7, 10-四氮杂环十二烷(cyclen)的氯甲基壳聚糖树脂(MCRC)为载 体，分别与 Mg(II)、Cu(II)、Zn(II)、Fe(II)、Fe(III)、Ce(III)、Ce(IV)等金属离子配合， 得到 7 种以不同金属离子为催化中心的氯甲基壳聚糖金属配合物树脂，并对树脂的理化 性质、催化活性等进行探讨，结果如下： 1）通过对对硝基苯磷酸二钠(PNPP Na2)及牛血清蛋白(BSA)的水解实验发现， MCRC-Ce(III)在水解磷酸单酯键及肽键方面，其催化性能均优于其它 6 种树脂。利用 SEM、FTIR、DSC 、XRD 等对其结构进行表征，证明了 MCRC-Ce(III)中活性基团及 cyclen-Ce(III)骨架的存在，且其表面致密光滑，粒径均匀规整，平均粒径为 500 μm 左右， 具有较大的比表面积，能为底物提供较多的结合位点，为其催化性能奠定了坚实的基础。 2）以 PNPP Na2 及 pBR322DNA 为底物，研究 MCRC-Ce(III)对磷酸单酯键及磷酸 二酯键的水解能力。结果表明，MCRC-Ce(III)在生理条件下能够显著加速 PNPP Na2 的 水解，在 4 min 时表观速率常数(Kobs)=8.39×10-2 M·min-1，是同等条件下 PNPP Na2 自身 水解速率的 807 倍。重复使用 6 次后，仍能保持 97.8%的催化能力。此外，MCRC-Ce(III) 在生理条件下同样能够显著加速 pBR322DNA 由双螺旋型向缺刻型及直线型转化。 3）以 BSA、肌红蛋白(Mb)、溶菌酶(LZM)为底物，研究 MCRC-Ce(III)对肽键的水 解能力。结果表明，在生理 pH，60 ℃条件下，MCRC-Ce(III)可分别在 24 h 及 12 h 内 将 BSA 及 Mb 水解 88%及 83%以上，在 50 ℃条件下，经 10 h 对 LZM 的水解率高达 97%。MCRC-Ce(III)对 BSA、Mb 及 LZM 的水解速率表观常数(Kobs)分别为 7.05、16.70 及 36.80×10-2 M·h-1，对应的最大反应速率常数(Vmax)分别为 17.56、22.46、37.60×10-2 M·h-1。MCRC-Ce(III)的催化活性是通过各部位相互协调实现的，其水解动力学行为符合 米氏反应机理，重复使用 6 次后，对 BSA 及 Mb 仍能保持 80%及 90%以上的催化活性， I 具有良好的稳定性。MCRC-Ce(III)对 BSA、Mb 及 LZM 的最适催化 pH 值均为 6.0，且 在 5.0~8.0 范围内均具有较高的反应速率，与常规食品体系中 pH 范围较一致。 综上所述，MCRC-Ce(III)作为一种新型固定化金属模拟酶，能够有效促进磷酯键及 肽键的水解，并且可以打破温度及 pH 对天然酶促反应的限制，具有广阔的前景，适于 工业中的规模化应用。 关键词：Ce(III)离子；壳聚糖树脂；非酶水解；磷酯键；肽键 II Hydrolysis Activity of Merrifield-Chitosan-Resin Complexed with metal ions for HYPERLINK /dict_result.aspx?searchword=%e7%a3%b7%e9%85%b8%e9%85%af%e9%94%aeamp;tjType=sentenceamp;styleamp;t=phosphate%2Bbond phosphate bond and peptide bond Abstract Hydrolysis of phosphate bond and peptide bond has an important theoretical significance and application value in the field of food processing, biopharming, and so on. To design an artificial enzyme with high stability a