肝细胞生长因子对人晶状体上皮细胞增生及移行作用的研究-眼科学专业论文.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 主要英文缩略词表 HGF hepatocyte growth factor 肝细胞生长因子 PCO posterior capsule opacification 后发性白内障 hLECs human lens epithelial cells 人晶状体上皮细胞 FCM flow cytometry 流式细胞术 FGF fibroblast growth factor 成纤维细胞生长因子 EGF epidermal growth factor 表皮生长因子 TGF-β transforming growth factor-beta 转化生长因子β PDGF platelet-derived growth factor 血小板源性生长因子 ECM extracellular matrix 细胞外基质 肝细胞生长因子对人晶状体上皮 细胞增生及移行作用的研究 华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科 硕士研究生：张光红 导 师：王智 教授 摘 要 【目的】 研究肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor ，HGF）对体外培养的 人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells ，hLECs）促增生及促移行的作用，初步 探讨 HGF 在后发性白内障（posterior capsule opacification, PCO）中可能存在的机制， 为 PCO 的临床治疗及预防提供新的依据。 【方法】1.取人晶状体上皮细胞株（hLECs—B3）进行传代培养，通过细胞形态 学及免疫组化染色法进行鉴定后，取3-5代细胞用于实验。2.噻唑盐比色实验（MTT 法）测定细胞的增生情况：（1）取第3代传代培养的hLECs，分别加入不同浓度的 HGF(2.5,5,10,20,40,50,100μg/L)，24h后MTT法测定细胞的增生情况；（2）选择能极显 著促进hLECs增生的HGF浓度（20μg/L），MTT法测定该浓度的HGF作用不同时间（6， 12，24，48h）后hLECs的增生情况。3.流式细胞术（flow cytometry，FCM）检测细胞 周期：选择能极显著促进hLECs增生的HGF浓度（20μg/L），FCM检测该浓度的HGF 作用24 h后hLECs细胞周期的改变。4.细胞损伤愈合模型测定细胞的移行情况：对已融 合的6孔培养板中的细胞进行划线，用不同浓度的HGF(10,20,50μg/L)进行干预，24小 时后细胞计数法计数进入裸露区的细胞，判定细胞的移行效应。5.采用HMIAS-2000 医学图文分析系统采集、处理图像和应用SPSS13.0 软件进行统计分析，探讨HGF对 hLECs增殖及移行的影响。 【结果】1.根据细胞的生长特性，形态学特征及波形蛋白、角蛋白免疫组化染色 阳性等确定细胞为hLECs。2.MTT法：（1）HGF浓度为10，20，40，50μg/L时，24h 后细胞吸光度分别为0.179±0.011，0.211±0.010，0.208±0.007，0.180±0.009与阴性 对照组0.162±0.028相比，差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01），增生率分别为10.5﹪， 30.2﹪，28.3﹪，11.1﹪，其中浓度为20μg/L时具有最大促增生效应；（2）20μg/L的 HGF作用时间为12h，24h时与阴性对照组相比，差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）。 HGF对hLECs促增生效应在一定范围内呈剂量-时间依赖关系。3.流式细胞仪分析： 20μg/L的HGF作用24小时后，与阴性对照组相比，实验组hLECs细胞周期发生明显改 变，差异有显著性（P＜0.05），表现为G0/G1期细胞显著减少，S期和G2/M期细胞增多。 4.细胞损伤愈合模型：HGF浓度为10，20，50μg/L时，24h后移行的细胞数分别为10.583 ±1.594，13.667±1.080，26.750±2.092与阴性对照组8.667±1.080相比，差异有显著 性（P＜0.05或P＜0.01），其移行能力分别为22.1%，57.7%，208.6%。HGF对hLECs 促移行效应呈剂量依赖关系。 【结论】 HGF 可促进 hLECs 的增生和移行，是 hLECs 的有丝分裂原和强有力的 促移行因子，参与 PCO 的发生与发展。 【关键词】肝细胞生长因子；晶状体上皮细胞；后发性白内障；细胞培养；增生 Effect of hepatocyte growth factor on proliferation and migration of human lens epithelial cells Depa