肝细胞肝癌乙肝病毒基因整合位点及临床病理分析-外科学(普外科)专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 10 英文缩略词对照表（按字母排序） 英文缩写 英文全称 中文全称 BLAST basical local alignement search tool 基本局部比对搜索工具 bp base pair 碱基对 DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 dNTP deoxyribonucleside triphosphate 三磷酸脱氧核糖核苷 EB ethidium bromide 溴化乙锭 EDTA ethylene dinitrilotetracetic 乙二胺四乙酸 HBsAg hepatitis B virus surface antigen 乙肝病毒表明抗原 HBV hepatitis B virus 乙型肝炎病毒 HCC hepatocellular carcinoma 肝细胞癌 PCR polomerase chain reaction 聚合酶链反应 rpm rations per minute 每分钟转速 Tm UDG melting temperature uracil DNA glycosylase DNA 解链温度 尿嘧啶 DNA 糖基化酶 肝细胞肝癌乙肝病毒基因整合位点及临床病理分析 中文摘要 目的 探讨乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus ，HBV）在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma ，HCC）染色体上的整合规律及其与临床病理参数的关系。 方法 收集安徽医科大学第一附属医院肝胆外科 2011 年 1 月～2012 年 2 月共 40 例 HBsAg 阳性 HCC 患者围手术期的一般临床资料和病理学资料，并进行术后随 访。以 40 例 HCC 组织的 DNA 为模板，HBV X 基因上游序列和人类基因组 Alu 重复序列为引物，应用巢式 PCR 原理，扩增出 HBV X 基因及其侧翼的人基因组 DNA 片段。PCR 产物进行全自动测序。所获结果经美国国家生物技术信息中心 （NCBI） BLAST 及 Mapviwer 检索确认 HBV 整合在染色体上的精确位置。结 合临床病理参数及随访资料分析 HBV DNA 整合对 HCC 患者的影响。应用 Kaplan-Meier 分析 HBV DNA 整合组以及未整合组患者术后的无瘤生存率及总体 生存率。Cox 回归单因素及多因素分析影响 HCC 患者术后生存的因素。 结果 40 份 HCC 组织中，18 例存在 HBV 整合现象，另 22 份标本未检测到有 整合。整合的标本中 15 例正向插入宿主基因，7 例反向插入宿主基因，其中 4 例既有正向插入，又有反向插入，2 例有两个 HBV 整合位点。其中 4 个基因（homo sapiens telomerase reverse transcriptase、mixed-lineage leukemia 4、cyclin E1 和 SUMO specific protease 5）发现被 HBV 重复整合，从病毒基因分析，整合可发 生于 X 基因的任意长度，且均以截短方式插入宿主细胞 DNA。HBV 整合与 HCC 患者在性别、年龄、AFP、镜下癌栓、脉管侵犯、包膜、子灶及复发等方面无关 （P0.05）；而与 HBeAg 阳性、HBV DNA 水平、肿瘤大小、分化程度呈正相关 （P0.05）。全组病例随访时间 3 月～35 月，平均 17.2±7.6 月，整合组平均总 体生存时间为低于未整合组（14.0±5.8 月 vs 19.8±8.1 月），整合组 1、3 年总 体生存率低于未整合组（77.7% vs 86.4% 、72.2% vs 81.8%）， 1、3 年无瘤生存 率 亦 低 于 未 整 合 组 (66.7% vs 86.4% 、 55.6% vs 63.6%) ， 均 无 统 计 学 意 义 （P0.05）。 结论 HBV 在 HCC 细胞染色体上存在整合且为不均衡分布。HBV 整合与 HCC 患者 HBeAg 阳性、HBV DNA 水平、肿瘤大小以及分化程度呈正相关，且影响 HCC 患者术后总体生存时间、无瘤生存率和总体生存率。HCC 术后复发为影响 HCC 患者术后生存的独立危险因素。 关键词 肝肿瘤 / 乙型肝炎病毒 / 病毒整合 Identification of Hepatitis B Virus Integration Sites in Hepatocellular Carcinoma Tissues from Patients and its Relationship with Clinicopathological Parameters Abstract Ob