太子参芜菁花叶病毒和蚕豆萎蔫病毒的双重RT-PCR检测.PDFVIP

园艺学报，2017 ，44 (4) ：784 –791 Acta Horticulturae Sinica 784 doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0940；http ：//www. ahs. ac. cn 太子参芜菁花叶病毒和蚕豆萎蔫病毒的双重 RT-PCR 检测 1,2 1 1 1 1,2,* 匡云波 ，陈满足 ，陆伊荣 ，陈 晶 ，叶祖云 1 2 （宁德师范学院生物系，福建宁德 352100 ； 福建省特色药用植物工程技术研究中心，福建宁德 352100 ） 摘 要：针对不同产地栽培的太子参（Pseudostellaria heterophylla ）中主要存在芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus ，TuMV ）和蚕豆萎蔫病毒（Broad bean wilt virus ，BBWV ）侵染且为害严重的情况，建立能 同时检测这2 种病毒的双重 RT-PCR 快速检测方法。根据 GenBank 数据库中的 TuMV 、BBWV 外壳蛋白 （coat protein，CP ）基因核苷酸序列的保守区域分别设计简并引物，在单一RT-PCR 检测体系的基础上， 建立和优化双重 RT-PCR 检测体系。双重 RT-PCR 的优化结果显示，最佳扩增循环数为 35，最佳引物浓度 为 0.4 μmol · L-1 ，最佳退火温度为 51 ℃。其灵敏度测定结果显示，2 种病毒在样品 cDNA 稀释至原液的 -4 10 倍后仍能扩增出特异条带。应用该方法对 7 份栽培太子参样品和 4 份脱毒苗样品进行了检测，结果表 明，建立的双重RT-PCR 检测方法可稳定、准确、灵敏地同时检测 TuMV 和 BBWV 。 关键词：太子参；芜菁花叶病毒；蚕豆萎蔫病毒；双重 RT-PCR 中图分类号：S 432.4+ 1；S 567 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2017 ）04-0784-08 Detection of Turnip mosaic virus and Broad bean wilt virus in Pseudostellaria heterophylla by Duplex RT-PCR 1,2 1 1 1 1,2,* KUANG Yunbo ，CHEN Manzu ，LU Yirong ，CHEN Jing ，and YE Zuyun 1 2 （Biology Department ，Ningde Normal University ，Ningde ，Fujian 352100 ，China； Engineering Research Center for Medical Plants with Fujian Provincial Characteristics ，Ningde ，Fujian 352100，China） Abstract ：A high incidence of both Turnip m