高山离子芥nced基因的表达和aba积累对逆境条件的响应-生物学 植物学专业论文.docxVIP

高山离子芥NCED基因的表达和ABA积累对逆境条件的响应摘要 高山离子芥NCED基因的表达和ABA积累对逆境条件的响应 摘要 本论文以高山冰缘植物中的高山离子芥(ChorispoFa bungeana鼢拍eLMey, Chor卸oFa bungea圳为研究材料，通过研究不同胁迫条件(低温4℃、水分、渗透 胁迫)下再生植株内源ABA的积累，及相关生理指标(细胞活力、质膜透性、膜 脂过氧化性、Pro含量、ABA含量)的测定，结合9．顺环氧类胡萝h素双加氧酶 ㈧CED)基因的克隆与表达，试图探讨高山冰缘植物胁迫适应性与ABA积累的关 系，揭示植物抗寒的生理和分子生物学机制。取得的主要研究结果如下： 1．克隆高山离子芥9一顺环氧类胡萝b素双加氧酶(NtED)基因，发现其与拟南芥 基因保持了96％的同源性。 2．以持家基因p-Actm作为内参照，对靶基因(NCED)进行半定量PCR扩增，发 现低温(4℃)胁迫处理后，NCED基因的表达量逐步增加；其他胁迫条件(高 温、渗透、SNP)处理也触发了NCED表达量的增加，但其基因家族各成员 的表达情况有所不同；可见NCED基因家族各成员存在不同的表达模式，由 此可以推断，低温下ABA的积累不是通过内部转运而是植物自身合成的， 同时是低温胁迫直接触发了ABA的积累，而不是经过水势改变、细胞体积 减小等间接过程诱导的。 3．通过对再生植株的抗寒性生理指标测定，发现低温4℃下，脯氨酸含量显著 增加，膜脂过氧化性变化不大，并且保持很高的细胞活性，表现出明显的抗 寒特征，同时内源ABA逐渐积累；而加入ABA合成抑gUN(nu)及NO合酶 抑黼U(LNNA)后，ABA含量降低的同时脯氨酸含量降低，TTC活性也大幅 降低(抗寒适应性降低)，说明高山离子芥在低温下可以通过内源激素ABA 的积累诱发相关渗透调节物质的变化，从而提高其低温适应性：另外，低温 胁迫下NO和NOS也参与了植物内源ABA的合成，这一过程可被NOS抑制 剂L，NNA所抑制。 4．高温、渗透、SNP处理后，都触发了内源ABA的积累，但是各项生理指标 存在不同的变化趋势，说明在胁迫条件下高山离子芥抗性适应性的建立存在 差异，其信号转导机制也有不同；同时也揭示出高山冰缘植物——高山离子 芥，除了具有很强的抗寒潜力，还有一定的抗高温、抗渗透胁迫能力，可以 高山离子芥NCED基因的表达和ABA积累对逆境条件的响应作为一种新型的抗性适应性研究模式植物。 高山离子芥NCED基因的表达和ABA积累对逆境条件的响应 作为一种新型的抗性适应性研究模式植物。 5．利用SMART技术构建了高山离子芥eDNA文库并加以强化，效价为1．17× 108pfu／mL，为合格文库。为后续的高通量诱导型基因的克隆奠定了基础。 综上所述，植物激素脱落酸(ABA)对高山冰缘植物抗寒适应性的建立有诱导 作用；NCED基因的诱导表达、NO和NOS的介导及内源ABA的积累是其低温 适应性机制中的重要部分。另外，胁迫条件下NCED基因的表达模式有所不同， 这为进一步揭示高山离子芥不同胁迫适应性的建立及信号传导途径奠定了坚实 的基础。 关键词：高山离子芥、再生植株、低温胁迫、脱落酸、9一顺环氧类胡萝h素双加 氧酶、抗寒性、生理指标、eDNA文库 2 高山离子芥NCED基因的表达和ABA积累对逆境条件的响应Abstract 高山离子芥NCED基因的表达和ABA积累对逆境条件的响应 Abstract In our experiments，we used Chorispora bungeana Fisch et．Mey(Chor{spora bungean)as material，by doing ABA—ELISA，measuring the physiological parameters as the proline，MDA content，REC and TTC activity and constructing semi。 quantitative RT-PCR ofNCED(9-cis—epoxycarotenoid dioxygenase)gene，in order to investigate the relationship between cold hardiness of regenerated plants and accumulation ofendogenous abscisic acid(ABA)after low temperature treatment(4。C) and found the mechanism of cold tolerance in alpine subnival plants．We got results as follow： 1．