植物组织培养实验_(新).ppt

植物组织培养 陈　　勇 一、培养基的成分及作用 二、培养基的制备 概念：本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项技术。即应用无菌操作方法，培养植物的一个离体器官、组织或细胞。 这项技术已在快速繁殖、去除病毒、加速育种进程、次生代谢产物生产和种质资源的保存等方面取得了巨大的经济效益、社会效益及生态效益。 根芽形成的激素控制理论： 细胞分裂素与生长素的比例与绝对含量，调控着植物组织的形态发生及细胞分化，当比值高时产生芽，低时产生根，比值适中时可能维持原组织生长而不分化。 植物组织培养的优点 1. 研究材料来源单一，无性系遗传背景一致 2 . 经济方便效率高 3 . 条件可控误差小 4. 生长快周期短重复性强 5 . 周年试验或生产 组织培养的几道主要工序： 培养器皿的清洗；培养基的配置、分装、包扎和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种；放入培养室培养；试管苗的种植与初期管理。 操作技术 1. 洗涤 培养过程中最经常最大量的工作之一，是洗涤培养瓶及其它常用器皿。 最常用的洗涤助剂就是家庭用的洗衣粉及肥皂。 2. 灭菌 有菌的范畴： 凡是暴露在空气中的物体，曾经接触过自然水源的物体，至少它的表面，毫无例外都是有菌的。 无菌的范畴： 经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，经其他物理的或化学灭菌方法处理过后的物体，是无菌的。 常用的灭菌方法可分为物理方法和化学方法两大类。 （1）培养基的灭菌： 常规方法是放入高压灭菌锅内加热加压灭菌。一般少量的液体只要121℃ 即每平方厘米1.1kg的压力20分钟就能达到彻底灭菌。 灭菌的功效主要是靠温度，而不是压力。 高压灭菌锅的使用可选用以下任一种： A .打开放气阀，煮沸15分钟后再关闭； B 打开放气阀煮沸至大量热蒸汽喷出再关闭； C 先关闭放气阀，待压力上升到0.5kg/cm2 以上时，打开放气阀放出空气，再关闭。 （2）不耐热的物质将采用过滤灭菌 如赤霉素、玉米素、脱落酸、尿素和某些维生素等。 过滤灭菌的原理：溶液通过滤膜后，细菌的细胞和孢子等因大于滤膜孔径而被阻。 （3）玻璃器皿及耐热用具等可采用干热灭菌 即利用烘箱加热到160-180℃ 的温度来杀灭微生物。 （4）用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌 （5）布制品采用高压灭菌 （6）其它 二、培养基的成分及作用 完善的培养基配方： 包括大量元素、微量元素、铁盐溶液、碳源、有机附加成分、植物激素、琼脂等。 配置中注意8个字： 大、微、铁、有、糖、琼、激、PH。 （一）大量元素 植物所需元素，浓度大于0.5mmol/l的应属于大量元素，而小于0.5mmol/l的则属于微量元素。 植物必需的元素在体内的生理作用有四方面（P49）。 MS培养基的特点：含有很高量的氮、钾，尤其硝酸盐的用量很大，还含有一定数量的铵盐。 （二）微量元素 植物所需的微量元素至少包括铁、硼、锰、锌、钼、铜、钴和氯。 微量元素的生理作用主要在酶的催化功能和细胞分化、维持细胞的完整机能等方面。 （三）铁盐 现在培养基中几乎都采用Fe·EDTA形态的铁盐。 铁促进细胞分裂与伸长，还影响到叶绿体的结构组成与叶绿素形成。 （四）有机成分 植物组织需要的一些维生素、氨基酸、肌醇，统称为有机附加成分。 维生素有维生素B1（硫胺素）、维生素B6（吡哆醇）、维生素B3或维生素PP（烟酸）、维生素B5（泛酸钙）等 氨基酸中最常用的是甘氨酸。 （五）糖 作用：碳源、碳骨架、提供底物与能源、维持一定的渗透势。 常用的碳源是蔗糖，浓度为2—5%。 （六）琼脂 琼脂是最好的固化剂，本身并不提供任何营养。 用量一般在4-10g/l之间。 （七）植物激素 植物激素是植物新陈代谢中产生的 天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠、萌发等许许多多的生理生化活动。 常用种类有： 1. 生长素类：生理作用（P61），主要有吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）