基于iTRAQ技术的乳腺癌及其不同舌苔患者差异蛋白质组学研究-临床医学专业论文.docxVIP

中文摘要目的：筛选乳腺癌白苔和黄苔患者与健康对照组之间的血清和唾 中文摘要 目的：筛选乳腺癌白苔和黄苔患者与健康对照组之间的血清和唾 液差异表达蛋白，以寻找乳腺癌早期诊断的生物标记物，并探索中医 舌苔形成的机制和原理。 方法：临床收集乳腺癌患者具有典型的白厚苔和黄厚苔以及健康 对照薄白苔、乳腺纤维瘤患者各10例，分别采集血清和唾液标本，提 取蛋白，去除高峰度蛋白，进行蛋白变性、还原及酶解，然后进行iTRAQ 标记和ESI-QTOF-Q II质谱鉴定，得到峰图用Data Analysi s，MASCOTT 2．2搜库和Scaffold软件分析，得到各组间血清和唾液差异表达蛋白。 从筛选的差异蛋白中选择明显相关的蛋白，在乳腺癌和乳腺纤维瘤患 者以及健康对照者各25例中用Wes tern-bl ot t ing验证差异表达蛋白。 结果： 1．血清中共鉴定出335个蛋白，其中达到严格定量标准的蛋白数 151个； 2．与健康对照组比较，乳腺癌(白苔组和黄苔组)与正常对照组 间共筛选出变化倍数1．5倍以上的23个血清差异表达蛋白； 3．乳腺癌白苔组和黄苔组组之间筛选出变化倍数1．5倍以上的7 个血清差异蛋白； 4．乳腺癌组与乳腺纤维瘤组之间筛选出变化倍数1．5倍以上的 8个血清差异蛋白，这些蛋白均有可能作为区分乳腺肿块良性和恶性 的标记物； 5．唾液中共鉴定出464个蛋白，其中达到严格定量标准的蛋白数125个； 5．唾液中共鉴定出464个蛋白，其中达到严格定量标准的蛋白数 125个； 6．本研究从两个乳腺癌组(白苔组和黄苔组)与正常对照组间 共筛选到9个差异蛋白； 7．从乳腺癌黄苔组和白苔组唾液之间共筛选到差异达到1．5倍 以上蛋白16个； 8．从乳腺癌组合乳腺纤维瘤组唾液间共筛选到5个差异达到1．5 倍以上蛋白； 9．在乳腺癌和乳腺纤维瘤患者以及健康对照者各25例中验证 Serotran-sferrin，Vitronectin，soform 1 of Gel sol in和Zinc finger homeodomain四个血清差异表达蛋白，其结果与iTRAQ结果一 致。 结论：本研究证实iTRAQ结合Lc-MS／MS技术能够快速、有效地进 行差异蛋白质组学研究，首次发现了多个与乳腺癌发病相关的血清和 唾液蛋白，有可能作为乳腺癌早期诊断的生物标记以及区分乳腺癌良 性与恶性的标记，同时发现血清和唾液蛋白与乳腺癌中医舌苔形成机 制密切相关。 关键词乳腺癌；iTRAQ；蛋白质组学；血清；唾液；生物标记物； 舌苔 1II 中山大学 中山大学 博上后出站报告 ABSTRACT Objective This study aims to explore the presence of informative protein biomarkers in the human serum and salivary proteome of breast cancer who have thick tongue coating of white or yellow and the mechanism about the tongue fur． Methods Taken 1 0 samples of breast cancer patients wim typical thick white coating and thick yellow coating，and 1 0 health controls with thin white coating and 1 0 mammary fibroma patients in clinic respectively．Blood and salivary were collected．Samples were depleted of high—abundant proteins using the Seppro IgY-C 1 2 column，and digested with trypsin and Labeled with iTRAQ reagent．The labeled peptides were fractionated by SCX．Portions of each fraction were analyzed by LC—MS／MS using a Proxeon Easy—nLC system and a Bruker ESI．．QTOF．．Q II mass spectrometer．Then used Mascott to search protein and obtain protein identification and use proteome softare scaff