2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法存在问题.ppt

⒈ * 【 2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法存在问题及修定内容 杜老师简介 原任青岛药检所微生物室主任，主任药师，担任2010年版药典编写与审定稿工作，并承担2010年版药典三部起草工作。 起草的指导思想 着力解决发展中的问题,提高我国药品标准总体水平，着力提升《中国药典》在国际社会中的地位和作用，提高综合竞争力， 2010年版无菌检查法 一、进一步确定了无菌检查法的定义： 无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。 应以一次检验为准，不允许复测 二、进一步明确了无菌检查保障 1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，但采用的措施不得影响微生物的生长。 2 、无菌检查环境检测日常检验还需进行环境检测。 3、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 三、培养基 1.删去硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的使用范围。 2.删去选择性培养基使用的表面活性剂种类 3.目的：扩大使用范围 4.选择应验证需使用的表面活性剂  3、培养基灵敏度试验 ⑴ 菌悬液制备中黑曲霉菌悬液的制备 “用适宜的方法吸出孢子悬液”。  ⑵在稀释液0.9%无菌氯化钠溶液中加入0.05％v/v）聚山梨酯80。 注：起到过滤作用，菌丝体吸出后会搅乱结果，只需孢子菌液。 制备均匀的孢子悬液，对孢子的损坏减小。 四、试验稀释液、冲洗液 ⒈ 增加根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。 ⒉试验中使用的中和剂、灭活剂和表面活性剂除证明其有效性外还应证明对污染的微生物无影响修改为无毒性。 3.稀释液：pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液；0.1%蛋白胨缓冲液；0.9%氯化钠溶液。其中 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液回收率最高，故基本选择此缓冲液。 0.9%氯化钠溶液在05版药典时已取消，专家经过一系列的验证，回收较低，与国际更不接轨。 五、方法验证试验 ⒈试验菌株 大肠埃希菌替代铜绿假单胞菌 ⒉供试品用量 薄膜过滤法 取每种培养基规定接种的供试品总量。 3.经验证证明，大肠埃希菌对很多菌敏感，铜绿假单胞菌只对个菌敏感，故替代。 　 六、供试品的无菌检查法 ⒈检验量　 直接接种法除另有规定外，每份培养基接种的供试品量按表2、表3规定。 　　　　 ⒉薄膜过滤法 　⑴滤膜选择 抗生素供试品滤膜应选择低吸附的滤器及滤膜。 ⑵冲洗量 每张滤膜每次冲洗量一般为100ml，总冲洗量不得超过1000ml 。 　 ①水溶液供试品 含抑菌成分所用的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验。 （3）在检测抗生素样品时，在冲洗时，抗生素会吸附在滤膜上，没法达到冲洗目的，故应购买低吸附的滤膜。 （4）每张膜最大冲洗量为1000ml，不包括供试品的量。　 微生物限度检查 1、培养条件 控制菌培养温度30℃～35℃。 2、结果报告 特殊品种可以最小包装单位报告 特殊品种包括∶ ⑴药典规定微量包装药品的检验量可以酌减。 ⑵一些贵重药品也应考虑检验量。 3、控制菌与细菌检验温度一致，这是专家验证的结果。30～35℃适宜细菌及其它菌的生长，故修改。 4、特殊品种：对于微量包装药典规定，贵重药品可酌减检验量。 3、检验量 ⑴中药膜剂检验量100cm2 。 ⑵沙门菌检验量为20 g或20ml（其中10 g用于阳性对照）。 4、供试液的制备 ⑴供试品检查时使用表面活性剂应证明其对 微生物生长和存活无毒性。 　⑵供试液的制备若需加温时，可采用其他经 验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超 过45℃。 ①离心沉淀集菌法 500转/分离心，不超过3分钟，取全部上清液用于检查。 影响因素 供试品 污染菌特性 适用范围 ⒈仅使用于微生物限度检查供试液的制备。 ⒉尽量避免使用，不可使用快速离心。 细菌、霉菌及酵母菌计数