组织糖胺多糖（GAG）总含量阿尔新蓝（alcianblue）比色法.docVIP

PAGE PAGE 1 组织糖胺多糖（GAG）总含量阿尔新蓝（alcian blue）比色法定量检测试剂盒 产品说明书（中文版） 主要用途 组织糖胺多糖（GAG）总含量阿尔新蓝（alcian blue）比色法定量检测试剂是一种旨在通过高盐萃取可溶性糖胺多糖，与阿尔新蓝染料结合，在丙醇解离溶液中，释放蓝色染料，由分光光度仪比色分析，定量检测组织样品中糖胺多糖含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种人体或动物组织（皮肤、肌肉等）、软骨、结缔组织、肿瘤组织等样品糖胺多糖水平检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测准确。 技术背景 糖胺多糖（glycosaminoglycan；GAG），又称为粘多糖（mucopolysaccharide），是体内最为丰富的异源多聚糖。糖胺多糖是一种未分叉的负电荷性长链多聚糖，由重复的二糖单位，包括六碳糖（hexose）或己糖醛酸（hexuronic acid），链接到己糖胺（hexoamine）上而成。糖胺多糖与核心蛋白（core protein）共价相联，构成蛋白多糖（proteoglycan；PG），成为细胞膜和细胞外基质（extracellular matrix；ECM）的主要成分。蛋白多糖的糖胺多糖在合成过程中发生硫酸酯化（sulfated group），其部位在O或N位上，有利于发挥各种不同的作用，包括酶的调节、细胞黏附、生长、迁移、分化，以及组织损伤反应。基于糖胺多糖的高度负电荷的特点，使用异染性（metachromatic）四价（tetravalent）阳离子蓝色染料阿尔新蓝（alcian blue），在酸性条件下，特异性的结合产生不溶性蓝色糖胺多糖染料复合物（Dye-GAG complex），在丙醇解离溶液中，释放出染料，通过分光光度仪（600nm波长）测定，来定量分析糖胺多糖的总含量。 产品内容 萃取液（Reagent A） 12毫升 高盐液（Reagent B） 1.5毫升 酸性液（Reagent C） 10毫升 染色液（Reagent D） 1.5毫升 清理液（Reagent E） 25毫升 解离液（Reagent F） 25毫升 标准液（Reagent G） 100微升 产品说明书 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里； 染色液（Reagent D）避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月 用户自备 无离子水：用于配制工作液 1.5毫升离心管：用于样品操作的容器 微型台式离心机：用于样品操作 比色皿或96孔板：用于比色分析的容器 分光光度仪或酶标仪：用于比色分析 实验步骤 样品预处理 手术取出动物组织，并秤重以确定200毫克组织重量 移入到一个液氮冻存管 即刻放进液氮罐过夜 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融） 放进一个1.5毫升离心管 加入500微升 萃取液（Reagent A） 强力涡旋震荡1分钟，充分混匀 放进4℃冰箱里孵育16小时，期间涡旋震荡1分钟五次 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415） 小心移取上清液到新的1.5毫升离心管 置于冰槽里备用 二、标准样品配制 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管 分别加入50微升 萃取液（Reagent A）到1至5号管 移取50微升 标准液（Reagent G）到1号管，混匀 小心移取50微升1号管稀释的 标准液（Reagent G）到2号管，混匀 小心移取50微升2号管稀释的 标准液（Reagent G）到3号管，混匀 小心移取50微升3号管稀释的 标准液（Reagent G）到4号管，混匀 将1至5号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表 管号 萃取液（Reagent A） 标准液（Reagent G） 标准糖胺多糖含量 1 50微升 50微升 20微克 2 50微升 50微升1号管 10微克 3 50微升 50微升2号管 5微克 4 50微升 50微升3号管 2.5微克 5 50微升 0 0 标准曲线测定 检测开始前，移取1.25毫升 酸性液（Reagent C）到15毫升锥形离心管，加入2.25毫升用户自备的无离子水，混匀，然后加入0.25毫升 染色液（Reagent D），混匀后，标记为 染色工作液（共5次检测），置于暗室里备用。然后进行下列操作。 移取50微升上述配制的 标准液（Reagent G