50hz磁场暴露对细胞培养液spr相位信号影响及其生物学意义劳动卫生与环境卫生学专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 致谢 感谢本实验室的其他成员，他们是高向伟老师、盛静浩老师、董豪杰、白荣盘、 翟棉星、郭静、方文攀、余东东、韩冰、张灵妲、陈木雄，因为你们的存在，让 我研究生的日子变得更加鲜活。 我要感谢我的爸爸、妈妈，我的双胞胎姐姐费腾。他们容忍了我的无理取闹， 一直坚定不移地支持我，是我内心温暖的来源，我的话不用说出口他们就都明白。 感谢我的舍友樊文洁、高倩倩，我们一起努力，一起放松，互相勉励。每天 晚上回到寝室，我就能感到彻底的放松，好像周身都被热水包围。 编剧兰晓龙有一句话我很喜欢，“饭碗就是我们的神明。”饭碗虽然算不上我的 神明，但从今往后，我定尽力不辜负我的饭碗，不辜负我的专业。感谢一切关心、 帮助过我的人!祝你们平安喜乐，诸事顺遂! n 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 50 Hz磁场暴露对细胞培养液SPR相位信号 影响及其生物学意义 浙江大学医学院 劳动卫生与环境卫生学 硕士研究生 费越 导 师 陈光弟教授 中文摘要 随着电力工业的快速发展与家用电器的日益普及，环境工频磁场(在我国主 要为50 Hz磁场)的暴露水平不断增加，其可能的健康危害日益引起公众的关注。 基于有限的流行病学研究证据，世界卫生组织下属的国际癌症研究中心将极低频 磁场(0-300 Hz)归类为人类可疑致癌原。大量实验研究结果提示工频磁场暴露可 能影响生物体或细胞产生生物学效应，但研究结果不一致，其关键是低强度工频 磁场与生物体作用的生物学机制不清楚。已有研究显示，静磁场、脉冲电场暴露 影响液体或溶液中生物大分子的物理特性，且受暴露的液体或生物大分子能作用 于细胞或生物体产生生物学效应。为此，我们假设工频磁场暴露体外培养细胞产 生的生物学效应可能是通过作用细胞培养液进而影响细胞功能实现的。 为探索工频磁场产生效应的机制，本学位论文研究分析了50 Hz磁场暴露对细 胞培养液物理特性的影响及经磁场暴露后的培养液对细胞功能的影响。首先，我 们将Ⅱ一MEM细胞培养液(含10％FBS)暴露于4．O mT的50 Hz磁场不同时间(o～60 min)，利用检测表面等离子体共振(Surface plasmon resonance，SPR)的相位信号 变化来分析培养液折射率的变化情况，并观察了不同强度(0～4．0 mT)50 Hz磁场 暴露对细胞培养液SPR相位信号的影响。结果显示，50 Hz磁场暴露引起cc．MEM细 胞培养液的SPR相位信号变化，且该效应具有磁场暴露时间、暴露强度依赖性。同 时，我们将细胞培养液暴露于4．0 mT的50 Hz磁场暴露30 min后停止磁场暴露，发 III 万方数据 浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 现培养液的sPR相位信号能够恢复并接近本底水平，提示该效应具有可逆性。 进一步，本研究利用受4．0 mT的50 Hz磁场暴露或假暴露1 h后的细胞培养液来 处理人羊膜上皮FL细胞，将细胞继续培养至48 h，采用CCK-8法分别检NFL细胞 的活力；将50 Hz磁场暴露组的细胞培养液孵育FL细胞5～60 min，采用Western blot 法检测MAPK信号通路(ERK，p38)和自噬信号通路(p62，LC3)相关蛋白的表 达水平；采f罚,／H2AX焦点形成实验检测细胞DNA双链断裂情况，采用碱性彗星实 验检测DNA片段化情况；利用流式细胞仪检测胞内活性氧自由基(ROS)的变化。 结果显示，受4．0 mT的50 Hz磁场暴露的细胞培养液培养FL细胞，对细胞的活力、 MAPK信号通路和自噬通路相关蛋白的表达水平、DNA损伤和胞Ros水平没有 显著影响。 另一方面，本研究采用相位SPR成像传感技术分析50 Hz磁场暴露对表皮生长 因子EGF溶液SPR信号的影响。结果显示，相对于假暴露组，50 Hz磁场暴露组的 EGF溶液SPR相位值较初始值减小。以表皮生长因子受体EGFR连接金膜为固定相， gEGF溶液为流动相，我们发现相位SPR成像传感技术能检测EGF和EGFR的相互 作用，但经50 Hz磁场暴露的EGF未影响EGF和EGFR的相互作用。进一步，我们分 析了受50 Hz磁场暴露的EGF作用细胞产生的生物学效应，即将50 Hz磁场暴露的 EGF配制入含1％FBS的0l—MEM细胞培养液并培养FL细胞，然后检测细胞活力和 EGFR聚簇。结果显示，EGF台g增强细胞活力和促进EGFR聚簇；但与假暴露组相 比，50Hz磁场暴露组的EGF未能影响FL细胞的活力和EGFR聚簇。 基于以上研究结果，我们认为，在本实验条件下，50 Hz磁场暴露引起含 10％FBS的值一MEM细胞培养液SPR相位信号的变化，但受50 Hz磁场暴露的细胞 培养液对FL细胞活力、MAP