肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制分析微生物与生化药学专业论文.docxVIP

Author’S Author’S signature： 一 supervisor7S signature： External Reviewers： Examining Committee Chairperson： Examining Committee Members： Date of oral defence：———————20 1 0—5—25 浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝婆太堂或其他教育机构的学位或 证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文 中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：磊妙汐 签字日期： 加2矿 年乡月；f日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解浙塑太堂有权保留并向国家有关部门或机构送 交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江太堂可以 将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：∥伤 导师签名：参堂铤 签字日期： 沙￡矿年 岁月零f日 签字日期：山tq年f月?1日 浙江人学博I：学位论文 浙江人学博I：学位论文 致谢 致 谢 衷心感谢我的导师王选锭教授和陈功祥教授给了我学习深造的机会和学术上 精心的指导，他们深邃的学术造诣、严谨的治学态度、国际化的视野都让我永志 不忘，受益终生。 衷心感谢张嵘老师在本研究的选题、实验、结果分析、论文撰写和修改等过 程的关心和指导以及生活上的亲切关怀与照顾。 衷心感谢细菌室其他老师5年来对我的帮助和大力支持。 衷心感谢周宏伟、张书梅、胡慧敏、董杰、顾迟和蒋颜等兄弟姐妹以及历年 来的几位实习生同学，感谢他们无私的帮助和支持，这将是我人生中非常难忘的 一段岁月。 衷心感谢俞云松教授和魏泽庆老师提供部分参考菌株以及在等电聚焦电泳实 验上的指导和帮助；衷心感谢陈卫良教授在核酸杂交和其它分子生物学实验方面 的指导和帮助；衷心感谢浙江大学肿瘤研究所提供部分实验条件。 衷心感谢我的挚友们，在我彷徨、焦虑和失落的时候给我的真诚的建议、开 导和安慰。 特别感谢我的父母，含辛茹苦把我抚养成人并供我求学到现在，期间他们没 有半句怨言，始终默默地支持、关心和鼓励我。 浙江人学博lj学位论文 浙江人学博lj学位论文 中文摘要 肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制研究 浙江大学医学院 内科学 博士研究生 蔡加昌 指导老师 王选锭、陈功祥 中文摘要 目的：本研究通过对86株碳青霉烯类抗生素耐药或敏感性降低的肠杆菌科细菌进 行p．内酰胺酶、外膜蛋白和外排泵检测，旨在阐明肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗 生素耐药的分子机制；通过碳青霉烯酶基因周围序列分析，探讨碳青霉烯耐药基 因的传播机制。 方法：琼脂稀释法测定抗生素对细菌的最低抑菌浓度(MIC)。脉冲场凝胶电泳和 肠杆菌基因问重复性一致序列．PCR(ERIC—PCR)分析菌株之问的同源性。等电聚 焦电泳、PCR扩增和序列分析确定菌株所产B一内酰胺酶的类型。质粒接合试验、 质粒消除试验和Southem blot杂交验证碳青霉烯耐药基因是否位于质粒上。提取细 菌的外膜蛋白作十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS．PAGE)，检测外膜蛋 白表达情况。羰酰氰氯苯腙(CCCP)抑制试验检测细菌中是否存在针对碳青霉烯 类抗生素的外排泵。用限制性内切酶EcoRI和HindlII对碳青霉烯酶基因编码质粒 进行酶切分型。对部分碳青霉烯酶基因编码质粒进行测序，分析碳青霉烯酶基因 周围DNA序列的基因结构。 结果-86株菌株对碳青霉烯有不同程度的耐药，亚胺培南、美罗培南和厄他培南 的敏感率分别为43．o％、44．2％和1．2％，其它p．内酰胺类抗生素和环丙沙星的耐药 率和耐药水平均很高，多粘菌素B的敏感率最高(92．9％)，阿米卡星次之(80．2％)。 同一医院内的菌株多数具有同源性，存在克隆传播现象。82株菌株产KPC．2型碳 青霉烯酶，5株产IMP型金属p．内酰胺酶(其中3株同时产KPC，2)，2株检测不 到碳青霉烯酶。TEM．1、SH