stat5在胶质瘤组织及细胞中的激活及功能研究神经外科学专业论文.docxVIP

·中文论著摘要·STAT5在胶质瘤组织及细胞中的激活及功能研究 ·中文论著摘要· STAT5在胶质瘤组织及细胞中的激活及功能研究 背 景 胶质瘤是最常见的恶性脑肿瘤，胶质瘤的预后与肿瘤细胞的增殖及侵袭能力 密切相关。胶质母细胞瘤(Glioblastoma Multiforme，GBM)是恶性程度最高的胶 质瘤，尽管临床上开展了一些针对性治疗，但其临床治疗效果仍然很差。信号转 导通路的激活促使肿瘤细胞的增殖和侵袭能力增强，从而导致了较差的预后。在 胶质瘤中，EGFR信号通路是促进肿瘤细胞增殖和侵袭能力的主要信号通路之一。 EGFR信号通路通过增强肿瘤细胞的增殖能力，组织的侵袭能力，血管的生成及 细胞趋化能力参与肿瘤的发生。在胶质瘤中，EGFR的高表达及突变现象发生率 很高。EGFR的激活与胶质瘤的进展和临床预后密切相关。EGFR的过表达和自激 活在肿瘤的发生中起到了重要作用。Leong等发现EGFR高表达为STAT5激活所 必需。许多线索证实STAT5在GBM中存在激活，而且STAT5在胶质瘤的恶性表 型发生过程中起到一定的作用。1．EGFR在恶性胶质瘤中通常高表达。2．基于我们 以前的研究，STAT5的激活促使ILl3Ra2出现表达，而ILl3Ra2通常在胶质瘤中 有表达。在肿瘤的微环境中，EGFR能被许多生长因子激活，而且EGFR能够激 活很多信号通路。在肿瘤的发展进程的研究中，对EGFR相关信号通路的研究主 要集中在核转录因子领域，例如我们下面即将展开研究讨论的STAT5． STAT5在很多组织中有表达，而且在很多恶性肿瘤中发现有STAT5的持续激 活。包括血液系统恶性肿瘤、乳腺癌和前列腺癌等。但是在胶质瘤中对STAT5与 增殖和侵袭能力的关系以及它在临床瘤组织中的激活现象的研究还很少。既然在 胶质瘤中EGF的作用机制己明确，那么，EGF激活STAT5后，胶质瘤增殖和侵 袭能力也有可能发生变化。对胶质瘤中STAT5新功能的研究可能使STAT5成为新 的肿瘤标记物，并为肿瘤的治疗带来新的治疗手段，因而，研究STAT5对GBM 细胞增殖和侵袭的影响是有必要的。我们此研究的目的是调查胶质瘤组织中 STAT5的激活现象，并探讨在体外胶质瘤细胞中磷酸化的STAT5对细胞增殖和侵 1 袭的影响。材料与方法 袭的影响。 材料与方法 l、组织芯片的制备。 肿瘤样本来源于中国医科大学附属第一医院和北京天坛医院诊断为胶质瘤并 接受治疗的患者的术中样本。诊断标准根据WHO标准。本研究基于赫尔辛基宣 言标准，并被当地医疗机构的伦理委员会批准并同意使用来源于两所医院的组织 样本进行科学研究。实验组标本来源于胶质瘤患者术中瘤组织，对照组非肿瘤样 本来源于癫痫患者行颞叶切除术的脑组织。组织在切除后快速液氮冷冻，福尔马 林固定，石蜡包埋。根据文献报道，用组织芯片机(Beecher Instrumems，Silver Springs，MD，USA)制备组织芯片。组织芯片样本包括25例散发星形细胞瘤(II 级)，27例间变星形细胞瘤(III级)和124例胶质母细胞瘤(IV级)。在每个胶质 瘤典型病变区域提取两个0．6mm孔径的组织样本，制作成由352个微点阵构成的 组织芯片。另外，选取13例癫痫手术切除的非瘤脑组织制作成组织芯片，作为对 照。 2、免疫组化染色。 用石蜡切片机将石蜡包埋的组织芯片的标本切割成厚度为41ma的切片，贴附 与防脱载玻片上，650C烘干30分钟。将石蜡切片用二甲苯脱蜡，水化，浸入EDTA 中，高压锅抗原修复。3％H202灭活，山羊血清封闭。p-STAT5a／b(Tyr694／Tyr699) (Santa cruz Biotechnology,Ine，CA，USA)抗体l：50稀释，4。C孵育过夜。阴性对 照组用山羊血清替代一抗40C孵育过夜。HRP标记的二抗(KIT-5930，MaxVision,Fu Zhou,China)室温孵育30分钟。DAB显色5分钟。苏木素复染，Permount(BIOS， Beijing，China)封片。显微镜(Olympus Optical，Japan)观察，图像采集。 免疫组化染色强度由两位病理学专家分别进行观察并结合瘤细胞阳性染色比 例和染色强度进行判定。根据两位专家判定分数的均值，对p-STAT5的表达情况 进行进一步的对比评估。瘤细胞阳性染色比例分级如下：0(无瘤细胞着色)，l (瘤细胞着色比例10％)，2(瘤细胞着色比例为10．50％)，3(瘤细胞着色比例 50％)。着色的瘤细胞比例20％认为有STAT5的持续激活。染色强度分为0(无 着色)，l(弱着色，呈淡黄色)，2(中等着色，呈黄褐色)，3(强着色，呈棕色)。 2 染色指数的的计算方法如下：染色指数=染色强度×阳性染色比例。染色指数4