trpv1对内皮细胞增殖迁移能力的影响及相关机制内科学专业论文.docxVIP

目 目 录 1 TRPVl对内皮细胞增殖、迁移能力的影响及相关机制研究 1 1．1 中文摘要 1 1．2 英文摘要 ． ．．4 1．4 第一部分TRPVl对内皮细胞增殖、迁移能力的影响 8 材料与方法 ．．8 结果 ．．16 参考文献 ．．23 1．5 第二部分TRPVl激活对P13K／AKT／eNOS信号通路的影响 ．．27 材料与方法 ．．27 结果 一38 全文结论 ．．41 参考文献 ．．42 万方数据 1．6 1．6 英文缩略词对照表 ．． 45 1．7 致谢 ．．45 1．8 TRPV通路和血管功能相关研究进展综述 ．56 参考文献 ．．57 万方数据 四川医登太坐硒±堂鱼逾塞TRPVl对内皮细胞增殖、迁移能力的影响及相关机制 四川医登太坐硒±堂鱼逾塞 TRPVl对内皮细胞增殖、迁移能力的影响及相关机制 摘 要 目的：随着社会经济的稳步发展人民生活条件在近年来也不断得到改 善，但是随之而来的高血压、糖尿病、冠心病等代谢性疾病的发生率、死 亡率却逐年攀升，其伴发的脑卒中、心力衰竭、心肌梗塞、肾功能损害以 及外周、心脏和中枢动脉血管病变严重威胁人类健康。在血管的解剖结构 中内皮细胞构成血管内壁的屏障，其形态、功能对血管疾病有着非常重要 的影响，且内皮细胞的损伤已成为血管疾病的启动因素。所以，对内皮细 胞功能极其影响机制的研究在心血管病等代谢性疾病的防治方面体现出极 其深远社会意义。瞬时受体电位通道．香草酸亚型1(Transient Receptor Potential Vanilloid l，TRPVl)可以被我们常用的食品红辣椒中的辣椒素 (Capsaicin)激活，既往大量的研究表明，Ⅱ@Vl广泛分布于神经系统中， 其也分布在内皮细胞中，TRPVl激活后可引起钙离子向细胞内流，使细胞 内钙离子(Intracellular Calcium，[Ca2+】i)浓度升高，长期激活TRPVl可以 使内皮细胞舒张，从而改善内皮细胞和血管功能；TRPVl与蛋白激酶 A(Protein Kinase A，PKA)、内皮型一氧化氮合酶(Endothelial Nitric．oxide Synthase，eNOS)信号通路相关，且PKA细胞信号传导通路与细胞增殖通 路密切联系；而磷脂酰肌醇．3激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase，P13K)／ 蛋白激酶B信号通路，即P13K／AKT信号通路是经典的增殖相关细胞信号 传递通路。综上，我们推测，TRPVl可调控P13K／AKT／eNOS通路信号转 导蛋白的表达，促进内皮细胞增殖、迁移，改善内皮细胞功能、预防血管 疾病。 材料和方法： 实验材料：整个研究由细胞实验构成。细胞实验以培养人脐静脉内皮 细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cell，HUVEC)为研究对象。 万方数据 一一． 一一． 四川匡叠盔堂亟±堂僮j盆塞 实验分组：分为对照组(Contr01)、辣椒素组(Capsaicin)、辣椒卓平 组(Capsazepine)、辣椒卓平+辣椒素组(Capsazepine+Capsaicin)、LY294002 组(LY294002)、LY294002+辣椒素组(LY294002+Capsaicin)、L．NAME 组(L．NAME)、L-NAME+辣椒素组(L。NAME+Capsacin)。 1、用免疫荧光染色法观察TRPVl在人脐静脉内皮细胞(HUvEC)的 表达； 2、应用Transewell实验检测各组干预条件干预后人脐静脉内皮细胞 (孙ⅣEC)的迁移能力； 3、用CCK8试剂盒检测各组干预条件干预后人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)的增殖能力； 4、用蛋白免疫印迹法检测各组干预条件干预后人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖相关信号通路蛋白(AKT、p-AKT、eNOS、p-eNOS) 的表达。 结果： 1、TRPVl在人静脉内皮细胞(MMC)中有表达。 2、辣椒素(Capsaicin)激活TI冲Vl后人静脉内皮细胞(HUVEC)迁 移能力增加；辣椒卓平(Capsazepine)、L-NAME和LY294002干 预处理后人静脉内皮细胞(孙ⅣEC)迁移能力下降。 3、辣椒素(Capsaicin)激活TRPVl后人静脉内皮细胞(HUVEC)增 殖能力增加；辣椒卓平(Capsazepine)、L—NAME和LY294002干 预处理后人静脉内皮细胞(HUVEC)增殖能力下降。 4、辣椒素(Capsaicin)刺激可明显上调人静脉内皮细胞(HUVEC) phospho—AKT、phospho—eNOS蛋白的表达；用P13K／AKT通道受体 拮抗剂LY294002干预HUVEC，或者用eNOS抑制剂L—NAME干 预后；人