wnt5a在腭发育及维甲酸诱导腭裂发生中的表达及其与shhfgf10相关性的研究口腔临床医学专业论文.docxVIP

学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使 焉学位论文的规定，同意大连医科大学保留并向国家有关部f1或机构 送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权 大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论 文。 论文作者签名：—主塑孥 指导教师签名：幺丝之翌 签字嚣期：皇受阵』月旦习 独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致 谢的地方外，论文中不包含其他入已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已 在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：—坞 签字日期：型蕉，年上月_／El Wnt5a在腭发育及维甲酸诱导腭裂发生中的表达 Wnt5a在腭发育及维甲酸诱导腭裂发生中的表达 及其与Shh、FGF．1 0相关性的研究 硕士研究生： 刘彬 专旨导教师： 王如教授 指导小组： 肖 晶教授 专业名称： 口腔临床医学 摘 要 背景：腭裂(Cleft Palate，CP)是口腔颌面部最常见的先天性发育畸 形，占所有先天性畸形的65％左右，‘全世界新生儿发生率1／700，在我国 发生率为1．82‰。在已知能诱发腭裂的环境因素中，维生素A的衍生物 全反式维甲酸(a11．trans retinoic acid，atRA)是致畸作用比较显著的一种， atRA所诱导的腭裂形成的机制尚不明确。小鼠腭裂的发生形式与人类腭 裂发生非常相似，而小鼠基因与人类的同源性高达99％以上，因此深入 了解小鼠腭裂发生机制将为剖析人类腭裂发生奠定理论基础。本实验应 用稳定的维甲酸诱导小鼠腭裂模型，观察正常组和实验组胚鼠的腭突发 育的形态学变化；借助免疫组织化学法和分子生物学RT．PCR技术，观 察Wnt5a基因在维甲酸诱导腭裂及正常对照组腭突发育中的表达和分布 的改变，同时检测信号分子Shh和FGF．1 O在不同的发育阶段的表达水 平变化。 目的：通过观察Wnt5a与Shh，FGF．10在正常腭突发育和腭裂形成 中不同发育阶段的表达和分布改变，探讨其在腭发育过程中发挥的作用 以及维甲酸诱导腭裂中的发生机制；并进一步探索信号分子Wnt5a与 Shh，FGF．1 O之间是否存在相关性。 方法：建立维甲酸诱导的腭裂小鼠模型，采用免疫组织化学技术检 测Wnt5a在胚胎l 4，1 5及1 6天的实验组和对照组小鼠腭突中的蛋白水 平表达和分布变化。采用RT．PCR方法检测信号分子Wnt5a，Shh和 FGF．10在转录水平的表达变化。 结果：1、维甲酸对腭突融合的影响：维甲酸实验组小鼠腭裂发生率 为1 00％。HE染色结果显示：对照组小鼠腭突发育正常，双侧腭突在中 线处接触融合。实验组小鼠腭突发育瘦小，腭突上抬障碍、舌体下降明显 延迟，两侧腭突不能在中线处接触融合。2、Wnt5a蛋白表达在腭突发育各个 延迟，两侧腭突不能在中线处接触融合。2、Wnt5a蛋白表达在腭突发育各个 主要时期的上皮和间充质细胞中，且表达呈时空变化。在ED l 5实验组， Wnt5a的mRNA的表达被上调且高于对照组(PO．05)。3、Shh和FGF．10 在腭突发育的不同阶段持续表达，在正常对照组中Wnt5a与Shh、FGF．1 0 表达水平的动态变化趋势一致，在实验组Wnt5a只与FGF．1 O的变化趋 势具有相关性。 结论=，1、维甲酸作用于小鼠发育早期，腭突发育短小、腭突上抬障 碍、舌体下降明显延迟，两侧腭突不能在中线处接触融合，从而导致腭 裂的发生。2、Wnt5a参与胚胎腭突的发生发育，在腭突发育过程中的表 达具有时空特异性，并与Shh和FGF．1 0的表达具有相关性。3、Wnt5a 与Shh。FGF．1 0在RA诱导腭裂小鼠腭突组织中的异常表达提示维甲酸可 能通过调节Wnt5a、Shh和FGF．1 O．等信号分子而导致了腭裂。 关键词：Wnt5a 腭发育 腭裂 维甲酸 信号分子 2 Expression Expression of Wnt5a and its relationship with Shh and FGF．10 in mouse palatal development and RA-induced cleft palate． Master degree candidate：Bin Liu Supervisor