肝细胞癌门静脉癌栓形成相关的生物标志物筛选及其血清诊断预测模型的建立外科学专业论文.docxVIP

复旦大学博士论文中文摘要 复旦大学博士论文 中文摘要 肝细胞肝癌(hepatocellular carcmoma，HCC)易于侵犯门静脉形成癌栓 (portal vein tumor thrombus，PVTT)导致肿瘤细胞的播散和转移。按照病程的 不同，PVTT分为镜下癌栓(microscopicportalveintunlorthrombuS．Mi—PVTT) 和肉眼癌栓(macroscopic portal vein tumor thrombus，Ma—PVTT)两个阶段。目 前对Mi．PvTT的研究报道不多，生物学特性还未知，能否作为HCC转移的标 志尚不明确，至今仍然难有一种手段能够早期发现或预测PVTT的形成。PVTT 的形成是多因素、多步骤的生物学现象，单因素和局限在基因水平的研究难以 全面揭示PvTT形成的分子机制，对PVTT的研究必须建立在高通量的基因组 学和蛋白质组学基础上。 表面加强激光解吸电离．飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption／ionizafion-time of flight-mass spectrometry,SELDI．TOF—MS)技术由 于其能为不同的生物样品快速地建立蛋白质或肽谱，该技术已被广泛地应用于 肿瘤学研究。本研究从肿瘤组织和血清蛋白质组学角度，分别筛选PVTT形成 生物标记物，探讨肿瘤组织的蛋白质组学和血清蛋白质组学的关系，为PVTT 形成的分子机制研究提供基础；同时比较不同临床病理特征对血清蛋白组的影 响，特别是不同阶段PvTT的血清蛋白组比较，并建立PvTT的血清蛋白质组 诊断预测模型。 第一部分蛋白质芯片SELDI-TOF-MS技术平台的建立 本研究目的是建立稳定的蛋白质芯片SELDI．TOF—MS技术平台，优化实验 的技术条件。选择肝细胞癌患者血清和肝细胞癌组织中分离的肿瘤细胞全蛋白 裂解液各8例，采用WCX2、H4、SAX2、IMAC3四种蛋白质芯片，经表面加 强激光解吸电离．飞行时间．质谱(SELDI．TOF．MS)N4定蛋白质谱，筛选血清和组 织细胞裂解液的最佳蛋白质芯片，摸索芯片最佳技术参数，评估该技术的稳定 性和可靠性。 结果： 1．蛋白质芯片显示蛋白质峰质荷比(m／z)主要在1100～30000范围内。 2．血清蛋白质图谱显示峰最多的为WCX2芯片，IMAC3其次，而H4和SAX2 较少。 3．细胞蛋白质图谱显示峰最多的为WCX2芯片，H4其次，而IMAC3和SAX2 复旦大学博士论文较少。 复旦大学博士论文 较少。 4．同一芯片蛋白质峰强度的变异系数(cv)值为0．184731，m／z的CV值为 0．000242；不同芯片间蛋白质峰的CV值为0．214244，m／z的CV值为 0．000055。 第二部分肝细胞癌门静脉癌栓形成相关的组织生物标记物筛选 本部分研究目的是筛选肝细胞癌(HCC)组织中与门静脉癌栓(PvTT)形 成相关的生物标记物，为探讨PvTT形成的分子机制提供研究基础。选择HCC 伴PVTT(肉眼)组织标本13例，包括原发瘤(P．A)和癌栓组织(P．C)，HCC 不伴PVTT组织标本13例，仅为原发瘤组织(NP—A)，从组织中提取的肿瘤细 胞裂解后，利用WCX2和H4蛋白质芯片，建立肿瘤细胞全蛋白质指纹图谱， Bio晡zard软件比较原发瘤之间及原发瘤和癌栓肿瘤细胞之间蛋白质差异。 结果： 1．WCX2芯片建立的蛋白图谱中，比较P．A与NP-A组蛋白，34个蛋白差异 有统计学意义(Po．01)，其中P-A组中蛋白上调22个，M／Z为2309、2365、 3013、2093，2496，2991、3，13、3247，5995，2326，2064，4232，1528， 2760、2973、2530、2948、1335、1791、3274、2401和413l，P—A组中蛋 白下调12个，M／Z为1207、6333、1440、1484、6172、12325、1663、1214、 1192、1137、1172和7708；比较P．C与P．A组蛋白，仅有一个蛋白差异 (Po．01)，在P—C组中蛋白下调，M／Z为2365。 2．H4芯片建立的蛋白图谱中，比较P．A与NP．A组蛋白，21个蛋白差异有统 计学意义(P0．01)，其中P—A组中蛋白上调9个，M／Z为3254、2998、3244、 1628、2947、4555、5994、1623和3852，P．A组中下调12个，M／Z为2735、 6177、1269、1245、3666、13801、2746、2718、1157、8405、15130和1225； 比较P．C与P-A组蛋白，没有明显蛋白差异(PO．01)。 3．四个差异蛋白为WCX2和H4蛋白质芯片共同检测出