九节龙皂苷-Ⅰ对胃癌生物学行为的影响 及机制研究-外科学专业论文
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摘要
摘要
九节龙皂苷-Ⅰ对胃癌生物学行为的影响及机制研究
博士研究生: 胡军红 导师: 张谢夫 郑州大学第一附属医院 河南郑州 450052
摘要
胃癌(gastric cancer)是最常见的恶性肿瘤之一,多种因素参与了该肿瘤 的形成和发生,也涉及到了多种相关蛋白的表达和功能异常,具体的发病原因 和机制目前还不清楚。虽然近年来胃癌的发病率在全世界范围内有所下降,但 是在许多亚洲国家包括中国在内,胃癌的发病率仍居高不下。目前临床治疗胃 癌的手段主要是手术、化疗及放疗等,尽管近年来基础和临床研究使胃癌的早 期诊断及治疗效果取得很大进步,但提高胃癌患者的 5 年生存率仍是临床治疗 的难题。由于胃癌早期症状不明显,患者被诊断时已是晚期或错过了最佳治疗 机会。因此,寻找特异性、灵敏性高,毒副作用小的治疗药物尤为重要。
天然药物具有副作用少、安全、廉价等优点,近年来在抗肿瘤研究中备受 关注。九节龙皂苷(ardipusilloside,ADS)是从天然植物金牛科紫金牛属植物 川产九节龙 Ardisia pusilla 中提取的一种天然化合物。大量研究证明,ADS 具 有抗肿瘤、降血压、抗病毒等多种生物学和药理学功能。越来越多的研究报道, 九节龙皂苷-Ⅰ(ardipusilloside-Ⅰ,ADS-Ⅰ)对肺癌、肝癌、人脑胶质瘤、人 子宫颈癌等多种肿瘤具有抑制作用,其抗肿瘤作用的主要机制有诱导细胞程序 性死亡(PCD),诱导细胞自我吞噬,抑制肿瘤的侵袭和转移等。
本研究首先观察了 ADS-Ⅰ对人类胃癌 TSGH、N87 细胞增殖、侵袭、迁移 及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响,又进一步探 索了 ADS-Ⅰ对胃癌影响的分子机制,最后建立了胃癌 N87 细胞移植瘤,以进 一步研究 ADS-Ⅰ对胃癌移植瘤的影响及机制。本文最终确立了 ADS-Ⅰ可能通
I
过 JAK/STAT3 信号通路调控胃癌生长、侵袭、迁移及 EMT,为胃癌的治疗提 供了新的思路,为 ADS-Ⅰ的抗肿瘤特性提供了新的依据。本研究共分以下三 个部分。
第一部分九节龙皂苷-Ⅰ对胃癌细胞增殖、侵袭、 转移及上皮间质转化的影响
方法
1. 利用 MTT 法检测不同浓度的 ADS-I(10、20、40μM)处理胃癌 TSGH、 N87 细胞 24,48,72,96h 后,对胃癌细胞增殖能力的影响,对照组为不含 ADS-I 的生理盐水。
2. 利用 Transwell 小室法检测不同浓度的 ADS-I(10、20、40μM)处理胃 癌 TSGH、N87 细胞 24h 后,对胃癌细胞侵袭能力的影响,主要是通过观察细 胞穿透基质胶的数目判定胃癌细胞的侵袭能力。
3. 采用细胞划痕实验检测 ADS-Ⅰ对胃癌 TSGH、N87 细胞迁移能力的影 响,10、20 及 40μM 的 ADS-Ⅰ处理胃癌 TSGH、N87 细胞 24h 后,通过细胞 的划痕距离的变化检测细胞的迁移能力。
4. Western blot 检测不同浓度 ADS-Ⅰ(10、20、40μM)处理胃癌 TSGH 细胞 24h 后,通过 EMT 相关标记物 E-钙粘蛋白和 N-钙粘蛋白的表达来判断 ADS-Ⅰ对胃癌细胞上皮间质转化的影响。
结果
1. MTT 检测结果显示,不同浓度 ADS-Ⅰ(10、20、40μM)处理,可以显 著抑制胃癌 TSGH、N87 细胞的增殖。
2. Transwell 小室法检测细胞侵袭的结果显示,不同浓度 ADS-Ⅰ(10、20、
40μM)处理胃癌 TSGH、N87 细胞 24h 后,可以显著减少细胞穿透基质膜的数 量。
3. 细胞划痕实验结果显示,不同浓度 ADS-Ⅰ(10、20、40μM)处
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