假单胞菌利用玉米芯水解液产胞外多糖研究-微生物学专业论文.docxVIP

摘要本研究主要目的是提高假单胞菌胞利用玉米芯水解液生产胞外多糖产量，通过优 摘要 本研究主要目的是提高假单胞菌胞利用玉米芯水解液生产胞外多糖产量，通过优 化发酵条件和对产生菌诱变育种为主要手段实现。 在假单胞菌基本特征研究中发现，实验菌株易于利用葡萄糖、木糖和蔗糖，E长， 并产多糖。培养基中碳源、氮源浓度和碳氮比对多糖的产生起关键作用，碳氮比低f 3时已没有多余的碳源用于次生代谢产物胞外多糖的合成。在低浓度无机氮或有机氮 的情况下，多糖产量和粘度都明显比高浓度氮源时要高。在提高发酵液粘度方面有机 氮源略有优势，但对多糖产量没有明显影响。通过实验确定在培养基中添加O．02％氯 化铵作为生长限制因子以提高多糖产量。 在高碳氮比培养条件下，假单胞菌生长达到稳定期时，0D值仍有快速增加的趋 势，说明实验菌株是在稳定期开始分泌胞外多糖。在固体培养时产多糖菌落为同心圆 形，外围透明圈为多糖，可作为诱变育种时的初筛指标。 比较了不同玉米芯粗制品对发酵的影响，发现粉碎后过2．0目筛下细料、筛卜謇H 料与未分筛的混合料对发酵效果的影响为：细料混合料粗料，但差异并不大．尤 其前两者之间。考虑加工工艺、生产成本及对原料的充分利用等因素，凶此确定卣接 采用粉碎后的玉米芯粉作为生产原料。实验还发现原料加倍时多糖产量也相应加倍， 最高可达26．96∥L。 一些对黄原胶发酵有促进作用的因子对实验菌株产多糖没有影响。而‘定浓度的 微量元素对多糖产量有促生作用，最后确定微量元素溶液的配方为1000ml母液中添 加MnS04 O．3克，CaCl2 012克，FeS04 O．8克。 实验菌株合成多糖时需要高通气量；培养液起始pH值在7．5～10．0之问均能乍 长产糖，但不能低于7．O，最适起始pH为8．O；在28～32℃都可以生产产糖；加大接 种量可缩短发酵时间；5天时产量已经达到最高。最后确定采用30小时菌龄，5％接 种量，20％装液量为最高，初始pH值为8．O，30℃／180rpm振荡培养5天为最佳发酵 条件。 为了提高多糖产量，以低能N+注入和紫外线辐射作为诱变手段对实验菌株进行 了诱变育种。研究发现紫外线杀菌曲线呈现常规性“肩型”曲线：而采用能节为 10KevN+注入处理时，假单胞菌存活率出现先降后升而后又降的特征性“马鞍型”曲 线。通过紫外线处理获得高产菌株UVZTl22、uVzT213，其产量分别提高了lO．53％ 和9．57％：通过低能N+注入处理，获得高产菌株NzTz07和NzTZll．其产量分别提 高了11．02％和6．83％。 假单胞菌多糖溶液流变学性质研究发现，该多糖溶液具有自身增粘性昶I触变中k， 属于假塑性流体。多糖溶液具有很强的环境适应性；pH值在l～14之恻粘度没有明 属于假塑性流体。多糖溶液具有很强的环境适应性；pH值在l～14之恻粘度没有明 显影响；耐高温．在60℃保持20分钟粘度没有变化：添加Nacl、caC03等无机盐对 粘度不产生影晌。Fe3+对该多糖溶液具有增粘性。当多糖与Fe2(s04)3质量比为2时形 成凝胶。强酸、强碱对多糖水解效果依次为HClNaoHH2S04，添加NaCl町使 多糖溶液在煮沸状况下保持粘度不变。 关键词：假单胞菌，胞外多糖，玉米芯，发酵条件．低能N+注入 ABSTRACTIn ABSTRACT In this studM the main object is to enhaJlce exopolysaccharide product using comcob carbon source．In order t0 do this，the conditiOns of femlentation of exopoiysaccharide by几P删bmD”傩印were rcsearch畦 aIld me Sn证n w∞treated by ultravioIet and Iow·en盯gy nitrogen ion be锄implantation． This strain could utilizc glucose，xylose and sucmse to produce exopolysaccharide． Carbon concentration，ni仃ogen concentration and carbon—nitrogen mtio key roles to produce exopolysaccharide．If earbon-nitrogen ratio was beIow 3．there was carbon to be used to pmduce exopolysaccharide．As for nitrogen source．10w concerl订ation is betcer t