生物化学试验授课教案.DOC

《生物化学实验》授课教案 ? 授课时间 2010. 9. 21 第 1 次课 授课章节 纸层析法分离鉴定氨基酸 任课教师 及职称 王增兰 教授 教学方法 与手段 示教为主，讲授为辅，指导纠正 多媒体 课时安排 3学时 使用教材和 主要参考书 教材《生物化学实验教程》第二版 刘箭、杜希华等编， 科学出版社，2010年 参考书：《生物化学实验原理和方法》李建武等编，北京大学出版社，1994年 教学目的与要求： 1. 学习氨基酸纸层析法的基本原理 2. 掌握氨基酸纸层析的操作技术(包括点样、平衡、展层、显色、鉴定) 教学重点，难点： 重点：纸层析的原理、分配系数的概念 难点：逆流分溶原理、纸层析的操作技术、氨基酸鉴定 教学内容： 实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 【实验目的】 1. 学习氨基酸纸层析法的基本原理 2. 掌握氨基酸纸层析的操作技术 【实验原理】 纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rate of flow, Rf）来表示。所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值： 在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。 【器材与试剂】 （一）器材 1. 层析缸 2. 点样毛细管 3. 小烧杯 4. 培养皿 5. 量筒 6. 喷雾器 7. 吹风机（或烘箱） 8. 层析滤纸（新华一号）9. 直尺及铅笔 (二) 试剂 1. 扩展剂(水饱和的正丁醇和乙酸混合液) 2. 氨基酸溶液 3. 显色剂 【实验步骤】 （一） 准备滤纸 在纸的一端距边缘2～3㎝处用铅笔划一条直线，每间隔3㎝作一记号。 （二） 点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在标记的位置上，重复2～3次。 （三） 扩展：层析缸中加入30ml扩展剂，将缝成筒状的滤纸直立其中。待溶剂上升适当距离后取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，吹干。 （四） 显色：滤纸表面均匀喷上茚三酮溶液，用热风吹干或置烘箱中（100℃）烘烤5min （五） 计算：计算各种氨基酸的Rf值。 （六）结果分析 复习思考题、作业题： 1. 纸层析法的原理是什么？ 2. 何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？ 下次课预习要点： 凝胶层析的工作原理和操作方法 实施情况及教学效果分析： 描述纸层析的原理、特点以及为什么它能让不同的物质移动的距离不同，怎么用眼睛看到不同氨基酸的位置——用茚三酮显色。引导学生讨论层析的影响因素以及本实验所要注意的事项。 学生理解并掌握纸层析原理及操作方法。 ?