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凋亡和Ki-67在宫颈癌新辅助化疗前后表达的意义 杨艳青(哈尔滨市第四医院病理科150026) 【中图分类号1R737.33【文献标识码］A［文章编号11672-5085 (2012)48-0009-02 【摘要】目的探讨宫颈癌组织细胞增殖和凋亡与新辅助化疗疗效的关系。方法 釆用免疫组织化学S-P法检测60名宫颈癌病人新辅助化疗前后宫颈癌组织中 ki-67表达阳性率的差异;用TUNEL法检测化疗前后宫颈癌组织中细胞凋亡阳性率 的差异。结果宫颈癌新辅助化疗后：组织疗效评定，有效率为(37/60) 61.7%； ki-67在化疗前后的表达阳性率分别为73.3%、36.7%,差异有显著性(Plt;0.05)； 化疗前后凋亡阳性率分别为33.3%、61.7%,表达差异有显著性(Plt;0.05)；组 织学无效、有效的病例在化疗前宫颈癌组织中：ki?67的阳性率分别为91.3%、 62.2%,差异有显著性(Plt;0.05),凋亡的阳性率分别为9.0%、48.6%,差异有 显著性(Plt;0.05)o结论 新辅助化疗能抑制宫颈癌细胞增殖、诱导癌细胞凋 亡；细胞增殖和凋亡有可能成为预测化疗疗效的指标。 【关键词】宫颈癌ki-67凋亡新辅助化疗 宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，位居女性恶性肿瘤的第二位，仅 次于乳腺癌。由于手术和放射治疗的应用，早期宫颈癌有较高的牛存率，lb,la 期患者5年牛存率为75%-90%,但是晚期宫颈癌或复发癌预后极差。近年来，宫 颈癌术前或放疗前的化学治疗(neoadjuvant chemotherapy, NACT)越来越受到国内 外学者的重视。化疗前后肿瘤细胞的病理、细胞增殖动力学、细胞凋亡和分子牛 物学改变等研究也逐步深入。细胞增殖和细胞凋亡的高低直接与肿瘤的消长相关, 为此我们观察了新辅助化疗前后宫颈癌组织中细胞增殖和凋亡的表达情况，现报 告如下。 1材料与方法 1.1临床资料 所有标木均来自木医院病理科存档蜡块(2008年?20口年)。 HE切片均经镜下病理检查证实，60名病人均具备化疗前后组织共120个样木(化 疗前均未进行任何治疗），宫颈癌组织经病理诊断其中鳞癌45例，腺癌15例， 宫颈癌的临床分期（FIGO）： lb期2例，lib期30例,Ila期7例,Illb期］7 例，IV期4例，宫颈癌组织分化程度：低分化16例，中分化32例，高分化3 例，中低分化9例，年龄从28?70岁之间，中位年龄49岁。 1.2研究方法 1.2.1试剂：免疫组化及TUNEL法原位杂交试剂盒均购于福州迈新生物 技术有限公司。 1.2.2免疫组化方法：将存档的福尔马林固定、石蜡包埋组织行4mu;m 连续切片，作HE染色和S P免疫组化染色，免疫组化S P法严格按照说明书操作 步骤进行,DAB显色、苏木精复染、脫水、透明、封片，显微镜下观察用已知阳性 切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照，并用高压锅对组织抗原进行修复处 理。 1.2.3末端标记技术染色方法及步骤：载玻片防脫片剂APES处理,石蜡切 片脱蜡至水f BS 洗。蛋白酶 K（20mg?L-l 于 10mmol?L-lTris HCIpH8.0 溶液中）,37°C 消化30min,PBS洗。0.3%H2O2（体积分数）封闭，室温30min,PBS洗。DAB显色底物 5min,显色满意后双蒸水冲洗，停止显色,苏木素衬染。脱水、透明、封片。阳性对 照只加标记混合液,不加末端脱氧核昔酸转换酶溶液。 124治疗方案：均采用顺钳（江苏豪森药业股份有限公司）联合化疗 DDP50mg/m2,静注，第1天（先水化）；VCR lmg,静脉冲击疗法，第1天； BLM 20mg/m2,静滴，第1?3天。每3周重复一次，共2个周期。 1.2.5结果判定：Ki?67结果判定：以肿瘤细胞核出现明显的棕黄色颗粒 为阳性表达。根据阳性肿瘤细胞占全部肿瘤细胞的比例将阳性结果分为4级,（?）： 阳性细胞lt;10%； （ + ）：阳性细胞10%； （++）：阳性细胞介于10%?60%之 间;（+卄）：阳性细胞＞60%。 TUNEL结果判定标准：鉴于化疗后组织出现片状、灶状坏死，采用凋亡 强度进行评判。凋亡细胞阳性定位于胞核，为蓝黑色颗粒。选择凋亡明显的4 个区域，在10X低倍镜下数凋亡小体，取其均值。凋亡强度分为三级（强阳、阳 性、阴性)：凋亡小体＞7/10X视野为强阳；3-7/10X视野为阳性；V3/10X视野 为阴性；强阳和阳性视为阳性。 化疗效果的判断：宫颈癌化疗后组织学疗效评定标准：以细胞损伤程度 进行病理疗效评定，根据细胞损伤程度分为三级：HE切片观察I级：癌细胞无 变化或轻度变性，见核分裂，癌巢处于增值状态，为无效。II级：大部分癌细胞 肿胀或固缩，胞浆空泡形成，灶性坏死，部分区域