绞股蓝皂苷对原代培养胚鼠中脑多巴胺能神经细胞的保护作用-外科学(神经外)专业论文.docxVIP

第四 第四军医大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 缩略语表 缩略词 英文全称 中文全称 GPs DA gypenosides dopamine 绞股蓝皂苷 多巴胺 iNOS inducible nitric oxide synthase MPTP 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine 诱 导 型 一 氧 化 氮合酶 1-甲基-4-苯基- 1,2,3,6- 四 氢 吡 啶 PD Parkinson’s disease 帕金森病 TH tyrosine hydroxylase 酪氨酸羟化酶 MAO-B monoamine oxidase B 单氨氧化酶 B 线 粒 体 转 运 通 MTP mitochondral transition pore 道 Cyt C cytochrome C 细胞色素 C Cas-3 caspase-3 天 冬 半 胱 氨 酸 蛋白酶-3 改良 Eagle 培养 DMEM Dulbeccos modified eagle media 基 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 3-(4,5- 二 甲 基 MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide 噻唑-2)-2,5-二 苯基 四 氮 唑 溴 盐 NGF nerve growth factor 神经生长因子 AD Alzheimers disease 阿尔茨海默病 凋 亡 蛋 白 酶 激 APAF-1 Apoptosis protease activating factor 1 活因子 1 绞股蓝皂苷对原代培养胚鼠中脑多巴胺能 神经细胞的保护作用 硕 士 研 究 生：熊东 导 师：高国栋 教授 第四军医大学唐都医院神经外科，西安 710038 中文摘要 帕金森病(PD)的主要病理改变是中脑黑质多巴胺(DA)能神经元的变性和 死亡，目前对 PD 的治疗仍以控制症状为主，尚无有效方法缓解病情进展，药 物的副作用更是严重影响治疗效果。绞股蓝早已广泛应用于中医方剂，长期食 用无毒副作用。研究显示绞股蓝中提取的多种有效成分作为抗氧化剂的神经保 护作用很多。我们希望通过检测绞股蓝皂苷(GPs)对体外培养原代中脑神经细 胞的保护作用，筛选最佳药物浓度和时间，观察其抗凋亡和抗氧化作用，为 GPs 用于临床治疗 PD 提供实验依据。 目的：探讨 GPs 对原代培养的胚鼠中脑 DA 能神经细胞的保护作用。方法 ： 原代培养胎鼠中脑腹侧神经细胞，分别应用 100、200、400、800 μg/mL GPs 作用 6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h，同时设空白对照组和阳性对照(NGF) 组，应用 MTT 比色试验检测 GPs 对细胞活性的影响，筛选 GPs 最佳浓度和作 用时间。免疫细胞化学染色检测抗酪氨酸羟化酶(TH)的表达；应用 1-甲基-4- 苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)诱导细胞损伤，同时设空白对照组和 GPs 预 处理组，应用免疫细胞化学染色和流式细胞仪分别检测诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)的表达和细胞凋亡。结果：MTT 检测结果显示 400 μg/mL GPs 作用 48 h 后细胞吸光值为(1.006 ± 0.062)，与 NGF 组比较差异无统计学意义(P＞0.05)， 与实验组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。TH 免疫染色显示 400 μg/mL GPs 组和 NGF 组 TH 阳性细胞数均高于空白对照组；iNOS 免疫染色显示 400 μg/mL GPs 预处理组 iNOS 阳性细胞数多于空白对照组，少于 MPTP 组；流式细胞仪 检测显示 400 μg/mL GPs 预处理组细胞凋亡率高于空白对照组，低于 MPTP 组 ， 差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论：400μg/mL GPs 作用 48h 对 MPTP 诱导 原代培养 DA 能神经细胞的损伤具有保护作用。 关键词：绞股蓝皂苷；多巴胺能神经细胞；酪氨酸羟化酶；诱导型一氧化氮 合酶；凋亡 Protective effects of gypenosides on primary culture of mesencephalic dopaminergic neurons in rat fetus Candidate for master: Xiong Dong Supervisor:Gao Guodong Department of neurosurgery,Tangdu hospital,Fourth Military Medical University,Xi’a