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学位论文作者: 日期: 年 月 日
摘要
摘要
姜黄素通过调节组蛋白乙酰化酶 p300 对阿尔茨海默病模型
大鼠认知功能的影响
研究生:徐志秀
导 师:王运良 教授 郑州大学第二附属医院 神经内科
河南 郑州 450014
摘要
目的和意义
随着社会人口老龄化进程的加剧,阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)已 成为老年痴呆病中最常见的类型,它是一种以进行性认知障碍和记忆力减退为 主要临床特征的中枢神经系统退行性疾病。至今,AD 病因不明确,发病机制复 杂,尚无有效的治疗方法。以表观遗传学为基础的疗法已成为当前AD 治疗的研 究热点。姜黄素是组蛋白乙酰化酶p300 的特异性抑制剂,在治疗 AD 的表观遗 传学机制方面未见报道。因此,本课题通过构建 AD 大鼠模型,探讨姜黄素通过 调节组蛋白乙酰化酶p300 对 AD 认知功能的影响。
材料和方法
采用 Morris 水迷宫筛选出平均逃避潜伏期(average escape latency, AEL)稳定 的二级雄性Wistar 大鼠 45 只,随机分为假手术组、A D 模型组、姜黄素给药组, 每组15 只。采用 D-半乳糖腹腔注射联合 Aβ25-35 海马立体定位的方法进行造模。 用二甲基亚砜(DMSO)和生理盐水将姜黄素溶解成 50mg/ml,姜黄素给药组大 鼠以 4ml/kg 腹腔注射,每天 1 次;假手术组大鼠和 A D 模型组大鼠注射等体积 的 DMSO 和生理盐水。治疗 28d 后,每组随机选取 8 只大鼠进行 Morris 水迷宫 测试大鼠的认知功能;剩余 6 只大鼠用 lml 注射器经枕骨大孔由延髓池抽取脑脊 液(cerebrospinal fluid, CSF),采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测 CSF 中 Aβ1-42 和 tau 蛋白的浓度;已抽取 CSF 的大鼠立刻断头取脑,采用光学显微镜观察大鼠 海马组织结构;采用免疫组织化学观察大鼠海马APP 和tau 蛋白的表达;采用蛋白
I
免疫印迹法(Western blot, WB)检测组蛋白 H3 乙酰化的修饰水平;采用 ELISA
试剂盒检测组蛋白乙酰化酶的活性;采用实时荧光定量 PCR(Real time PCR,
RT-PCR)检测 p300, APP, BACE1 的 mRNA 水平。
实验结果
1. 姜黄素对 AD 模型大鼠的认知功能的影响 与假手术组大鼠相比,AD模型组大鼠的 AEL 延长(P0.05,P0.01)、目标
象限停留的时间短(P0.01)、穿越平台的次数减少(P0.01);与AD模型组大
鼠相比,姜黄素给药组大鼠的AEL 缩短(P0.05,P0.01),目标象限停留的时 间长(P0.01),穿越平台的次数增多(P0.05)。
2. 姜黄素对 AD 模型大鼠海马组织结构的影响
与假手术组大鼠相比,AD 模型组大鼠海马 CA3 和 DG 区神经元细胞部分 固缩、深染,血管间隙增宽,细胞水肿明显;与 AD 模型组大鼠相比,姜黄素给 药组大鼠海马 CA3 和 DG 区神经元细胞固缩、深染少,血管间隙窄,细胞水肿
减轻。
3. 姜黄素对 AD 模型大鼠海马神经元 APP 和 tau 蛋白的影响 与假手术组大鼠相比,AD 模型组大鼠海马 CA3 区神经元细胞 APP 和 tau
蛋白的平均光密度值升高(p0.01);与 AD 模型组大鼠相比,姜黄素给药组大鼠 的CA3 区神经元细胞 APP 和 tau 蛋白的平均光密度值降低(p0.01, p0.05)。
4. 姜黄素对 AD 模型大鼠脑脊液中 Aβ1-42 和 tau 蛋白浓度的影响
与 假 手 术 组 大 鼠 相 比 ,AD 模 型 大 鼠 脑脊液中 Aβ1-42 的浓度明显降低
(P0.01)、ta
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