焦炉逸散物有机提取物对支气管上皮细胞损伤的实验研究-公共卫生与预防医学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 The Experimental Study of Injury of Coke Oven Emissions Organic Extracts Exposure on Bronchial Epithelial Cells Dissertation Submitted to North China University of Science and Technology in partial fulfillment of the requirement for the degree of Master of Medicine by Li Hongli (Public Health and Preventive Medicine) Professor Yao Lin Supervisor:  Ph. D Duan Huawei June, 2015 独 创 性 说 明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含 为获得华北理工大学以外其他教育机构 的学位或证书所使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了 明确的说明并表示了谢意。 论文作者签名： 日期： 年 月 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文， 学校有权保 留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论 文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检 索和交流。 作者及导师同意论文公开及网上交流的时间： □ 自授予学位之日起； □ 自 年 月 日起。 作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 摘 要 摘 要 目的 焦炉逸散物（coke oven emission，COE）是在焦化生产过程中释放的主要环 境污染物，除颗粒物外，具有多种致突变和致癌性的多环芳烃。长期暴露于 COE 容易引发机体产生慢性炎症和肿瘤，而炎症又可以促进肿瘤细胞的转化、生长和转 移。本研究应用不同染毒剂量的焦炉逸散物有机提取物作用于 16HBE 细胞建立 24h 和 5d 细胞染毒模型。初步探讨焦炉逸散物有机提取物对支气管上皮细胞的损 伤情况。为后续 COE 暴露人群的效应性生物标志物分析提供依据和线索。 方法 1 COE 有机提取物作用于 16HBE 细胞建立 24h 染毒模型：将人支气管上皮 细胞系 16HBE 接种在含有 10%的胎牛血清的 MEM 培养基中，在 37℃和 5% CO2 的条件下传代培养。当细胞融合率达 70%时用不同浓度的焦炉逸散物有机提取物 处理 24h，作用浓度依次为 5mg/L、10mg/L、20mg/L，胎牛血清浓度为 5%。同时 设置 0.1%DMSO 的 COE 溶剂对照，每个剂量组均设置平行样。2 COE 有机提取物 作用于 16HBE 细胞 5d 染毒模型建立：细胞培养条件、染毒物质的剂量与 24h 模型 相同，连续染毒 5d，每次更换新的含 COE 有机提取物的培养基，每个剂量组均设 立平行样。3 应用 MTT 和乳酸脱氢酶（LDH）释放实验评估 COE 对 16HBE 细胞 的细胞毒性。4 应用流式细胞仪检测 16HBE 细胞内活性氧（ROS）的释放水平。5 应用彗星实验检测 16HBE 细胞的 DNA 损伤情况。6 应用悬液芯片 Human Th17 Cytokine Panel 15-Plex 检测上清液中 IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-17F、 IL-21、IL-22、IL-23、IL-25、IL-31、IL-33、γ 干扰素（interferon-γ，IFN-γ）、可 溶性细胞表面分化抗原 40 配体（sCD40L）和肿瘤坏死因子 α（TNF-α）的表达情 况。7 应用蛋白免疫印迹方法检测 IκBα、P-IκBα、P65 和 P-P65 蛋白表达水平。 结果 1 20mg/L COE 有机提取物染毒 16HBE 细胞 24h 后，细胞存活率为 89.38% （P＜0.05），LDH 释放量为 147.68%（P＜0.05）。10 mg/L 和 20 mg/L COE 有机 提取物染毒 16HBE 细胞 5d 后，LDH 释放量分别为 124.39%和 149.64%（P＜ 0.01）。说明 COE 有机提取物可以损伤 16HBE 细胞，染毒周期增加，毒性亦增 加。2 COE 有机提取物无论 24h 染毒还是 5d 染毒均能检测到活性氧的释放，随着 染毒剂量的增加而逐渐升高（