胶原-碳纳米管复合物薄膜对胚胎大鼠皮层神经元突起发育和神经干细胞分化的影响-神经病学专业论文.docxVIP

解放军医学院硕士学位论文 解放军医学院硕士学位论文 PAGE 1 PAGE 1 万方数据 缩略词表 缩略词 英文名称 中文名称 ECM Extracellular Matrix 细胞外基质 SWCNTs Single-walled Carbon nanotubes 单壁碳纳米管 MWCNTs Multi-walled Carbon nanotubes 多壁碳纳米管 NSCs Neural Stem Cells 神经干细胞 PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液 TEM Transmission Electron Microscope 透射电子显微镜 SEM Scanning Electron Microscope 扫描电子显微镜 FBS Fetal Bovine Serum 胎牛血清 PLL Poly-L-lysine hydrobromide 多聚左旋赖氨酸 bFGF basic Fibroblast Growth Factor 碱性成纤维细胞生长因子 EGF Epidermal Growth Factor 表皮生长因子 DAPI 4,6-diamindino-2-phenylindole 4,6-联脒-2-苯基吲哚 DMEM Dulbecco’s Modified Essential Medium HEPES N-2-hydroxyethylpiperazine-N’ -2-ethanesulfonic acid  培养基 N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙 磺酸 d Day 天 min Minute 分钟 作 者：孙洪吉 学科专业：神经病学 导 师：解恒革 胶原-碳纳米管复合物薄膜对胚胎大鼠皮层神经元突起发育和神 经干细胞分化的影响 中文摘要 目的 探讨胶原-碳纳米管复合物薄膜对胚胎大鼠皮层神经元突起发育和 NSCs 分化 的影响，为该材料应用于体外大脑皮层构建和体内中枢神经系统损伤的修复奠定 基础。 材料与方法 一、胶原-碳纳米管复合物薄膜的制备：我们选用了 SWCNTs 和鼠尾 I 型胶原 作为原料，利用超声的方法进行混匀来制备胶原-碳纳米管混合溶液，最后利用烘 干技术制作成胶原-碳纳米管复合物薄膜。 二、胶原-碳纳米管复合物薄膜的物理学和生物学评价：我们将制备好的胶原 -碳纳米管复合物薄膜进行扫描电子显微镜观察其表面形貌，通过电化学工作站测 量其导电性，通过阿尔玛蓝试剂来评价材料与胚胎大鼠皮层神经元、NSCs 的生 物相容性。 三、胶原-碳纳米管复合物薄膜对胚胎大鼠皮层神经元突起发育的影响：将胚 胎大鼠皮层神经元接种在材料的表面，在体外培养 3d 后，对细胞进行固定，进行 微管相关蛋白-2 的免疫荧光染色，并采用 IMAGE J 软件中的 Neurite Tracer 插件 对神经元突起的数量和长度进行测量记录，并进行统计分析。同时，通过 SEM 对 体外培养 7d 的皮层神经元与材料接触的表面形貌进行观察。 四、胶原-碳纳米管复合物薄膜对胚胎大鼠皮层 NSCs 分化的影响：我们将胚 胎大鼠皮层 NSCs 接种在材料的表面，通过撤掉 EGF、bFGF，来观察体外培养 7d 后，材料对 NSCs 分化为不同谱系神经细胞的影响，并进行统计分析。此外， 采用 SEM 对体外培养 7d 后，NSCs 与材料接触的表面形貌进行观察。 结果 一、胶原-碳纳米管复合物薄膜的制备：1、分离所得的鼠尾 I 型胶原溶液清 澈透亮，黏度适中，胶原浓度约为 3 mg/ml；2、制备的胶原-碳纳米管混合溶液肉 眼观察无明显聚集物存在，TEM 观察：1.5 mg/ml 和 2 mg/ml 的胶原-碳纳米管溶 液中的聚集物相对较多；3、制备的胶原-碳纳米管复合物薄膜肉眼观察均匀程度 高，无明显杂质存在。 二、胶原-碳纳米管复合物薄膜的物理学和生物学评价： 1、SEM 观察，不同浓度的胶原-碳纳米管复合物薄膜的均匀程度不同，同透 射电镜结果一致，1.5 mg/ml 和 2 mg/ml 浓度组的胶原-碳纳米管复合物薄膜出现 的聚集物较多，表面形貌相对不均匀； 2、电化学工作站导电性测量结果发现：从 0 mg/ml 到 2 mg/ml 的不同浓度的 胶原-碳纳米管复合物薄膜的电阻率（Ω*m）分别为：9.19x104，14.1，5.77x10-1， 1.89x10-3，1.54x10-4； 3、阿尔玛蓝生物相容性检测结果发现： 体外培养 7d 后，从 0 mg/ml 到 2 mg/ml 的不同浓度的胶原-碳纳米管复合物 薄膜上，胚胎大鼠皮层神经元的平均氧化还原率（%）分别为：48.