姜黄素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒抗癌活性及逆转多药耐药研究-生物医学工程专业论文.docxVIP

原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 ◆ 工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特Jj,JDn以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不 包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我 共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 ● 作者签名： ◆ 学位论文版权使用授权书 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校 ◆ 有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文， 允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内 容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》， 并通过网络向社会公众提供信息服务。 ● 作者竽名：l壁薹骂L 日期：型年』月卫日 ? ? ? ? ? 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 摘要 目的： ◆ 目前，抗肿瘤药物普遍存在药物靶向性差和全身毒性问题，限制 了药物疗效的发挥和长期使用。而且普遍存在的肿瘤多药耐药 (multidrug resistance，MDR)也是治疗失败的主要原因。目前，体 外逆转MDR的药物有很多，但是存在着体内不稳定，肿瘤靶点性差， 毒副作用大等缺点。 近年来国内外学者开始从中药中筛选提取低毒的可逆转MDR的 ● 有效成分。姜黄素(curcumin，CUR)是常用中药姜黄(curcuma) 中一个生物活性成分，具有多方面的药理作用，被认为是理想的抗癌 化疗药物之一，具有逆转MDR的作用。作为中药逆转剂又较其他化 药逆转剂有很大的优越性。但是姜黄素存在水溶性差，体内吸收少、 不稳定，易降解等缺陷，因此限制了其应用。 生物纳米载体的应用不仅改善药物的溶解度，提高药物的生物利 用度，而且还具有缓释性，延长药物体内滞留时间和靶向性，从而降 ● 低药物的毒性。 本研究的目的就是基于生物纳米载体的优势以及姜黄素的药学 特点，筛选最佳的生物纳米材料，制备载姜黄素的纳米粒，并考察该 纳米粒的抗癌活性及对人乳腺癌阿霉素耐药细胞MCF．7／ADR的逆 转作用机制，为制备高效、长效、靶向和低毒的姜黄素奠定基础，为 探索逆转MDR提供一条思路。 ● 方法： (1)CUR-PBCA-NPs的制备及表征 采用阴离子乳化聚合法制备CUR-PBCA．NPs，通过单因素实验 结合正交试验对C切oPBCA-NPs的制备工艺进行了优化，考察稳定 剂的种类、反应过程的pH值、单体的用量、稳定剂的用量及药物浓 ■ 度对纳米粒的粒径、表面电位和包封率的影响，确定最佳制备工艺。 透射电子显微镜和激光粒度分析仪分别对纳米粒的外形、粒径和 表面电位进行表征，紫外分光光度计和高效液相色谱的方法在420nm 处测定药物的载药量和包封率，运用体外动态透析的方法研究了纳米 博士学位论文 博士学位论文 中文摘要 粒中姜黄素的体外释药。 (2)体内外抗癌活性及药代动力学研究 MTT法比较CIJloPBCA．NPs、空白纳米粒(PBCA加s)和游 离姜黄素(CUR)对人肝癌细胞HepG2、Bel7402、Huh7和正常肝细 ◆ 胞L02存活率的影响，流式细胞仪和荧光显微镜检测不同浓度的载药 纳米粒对HepG2细胞细胞周期和细胞凋亡的影响，western blotting 方法比较了三者对HepG2细胞中的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和环氧合酶一2(cyclooxygenase， COX．2)表达的变化。 建立裸鼠移植性肝癌动物模型，尾静脉注射PBCA-NPs、 CUR-PBCA．NPs和生理盐水后测定肿瘤大小，免疫组化法检测肿瘤 ◆ 组织中的VEGF和COX-2蛋白的表达。通过测定SD大鼠尾静脉注 射CUR和C切oPBCA加s后的血液中姜黄素的药物浓度来比较其主 要的药物动力学参数。 (3)逆转多药耐药的研究 选用人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF．7／ADR作为耐药细胞模 型。MTT法比较CUR、CUR-PBCA．NPs和PBCA-NPs对MCF一7几∞R 的逆转倍数，流式细胞仪测定CUR-PBCA-NPs对MCF．7／ADR细胞 ◆ 周期及细胞摄取阿霉素的影响。Western blotting方法比较CUR、 CUR-PBCA-NPs和PBC