姜黄素类似物L6H4对2型糖尿病大鼠睾丸抗氧化及抗凋亡的作用-病理学与病理生理学（病理）专业论文.docxVIP

温州医科大学硕士学位论文姜黄素类似物L6H4对2型糖尿病大鼠 温州医科大学硕士学位论文 姜黄素类似物L6H4对2型糖尿病大鼠 睾丸抗氧化及抗凋亡的作用 捅要 【目的】 观察姜黄素类似物L6H4对高脂饮食及2型糖尿病大鼠睾丸氧化应激指标的影响， 及其对睾丸生精细胞增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen， PCNA)、BAX和BCL-2表达的影响。探讨姜黄素类似物L6H4对高脂饮食及2型 糖尿病大鼠睾丸抗氧化和抗凋亡作用可能的机制。 【方法】 雄性SD大鼠60只，随机分为正常组(normal control group，NC，n=8)、高 脂实验组(n=20)和糖尿病实验组(n=32)。后两实验组均喂以高脂饲料。4周 后， 糖尿病实验组禁食12小时， 再腹腔注射链脲佐菌素 (streptozotoc i n，STZ)30mg／Kg复制2型糖尿病模型。造模成功标准：72小时后 的尾静脉空腹血糖(fasting blood—glucose，FBG)FBG≥16．7mmol／L，一周后复 测，FBG≥16．7mmol／L。造模达标的大鼠，再随机分为糖尿病组(diabetic mellitus group，DM，n=lO)和糖尿病治疗组(diabetic treatment group， DT，n=14)，高脂实验组随机分为高脂组(high fat group，HF，n=8)和高脂 治疗组(high fat treatment group，FT，n=12)。FT组和DT组均以0．2mg／Kg 的剂量灌胃注射姜黄素类似物L6H4(L6H4溶于1％羧甲基纤维素钠中)8周，每 天一次；而NC组、HF组和蹦组则用等量的羧甲基纤维素钠(CMCNa)进行灌胃 对照治疗，每天一次。实验结束时，禁食12h腹腔注射10％水合氯醛(O．3ml／lOOg) 麻醉后处死大鼠。收集血清及睾丸标本，观察各组大鼠体重及睾丸重量；检测空 腹血糖、胰岛素水平(fasting insulin，FINs)，计算胰岛抵抗指数(HOMA—IR)； 光学显微镜下观察睾丸生精小管的形态变化；使用TUNEL试剂盒检测各组大鼠睾 丸生精细胞的凋亡变化：免疫组织化学法检测各组大鼠睾丸生精细胞的增殖细胞 核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)表达的情况；检测各组 大鼠睾丸组织氧化应激指标SOD、MDA的变化；Western Blot法检测各组大鼠睾 丸PCNA、BAX、BCL-2表达的水平及BAX／BCL-2比值的变化。 【结果】 1．各组大鼠体重及睾丸重量的变化： HF组大鼠体重较NC组明显增加(P0．05)，而DM组大鼠体重较NC组明显 下降(P0．05)；DM组大鼠睾丸重量较NC组明显减轻(P0．05)。 2．血糖、胰岛素及胰岛抵抗指数水平 与NC组相比，DM组的FBG、FINs、HOMA-IR均明显升高(氏0．01)；DT组 2 万方数据 温州医科大学硕士学位论文较DM组的FBG、FINs、HOMA-IR均明显降低(P0．01)。HF组较NC组FBG、HOMA-IR 温州医科大学硕士学位论文 较DM组的FBG、FINs、HOMA-IR均明显降低(P0．01)。HF组较NC组FBG、HOMA-IR 均明显升高(尸叼．01)：FT组较HF组的FBG、H0淞一IR均明显降低(PO．01)。 3．大鼠睾丸光镜下组织病理学变化 与NC组相比，HF组睾丸生精小管变形，各级生精细胞层次减少、排列紊乱， 在靠近生精小管基膜的部位可见长型成熟精子滞留。FT组睾丸的组织结构较HF 组有明显改善，精子滞留现象缓解。DM组睾丸的镜下组织结构破坏严重，生精 小管上皮变薄，基膜部分不连续，管内生精细胞脱落严重。各级生精细胞变小、 层次减少、精子减少。而DT组睾丸的上述组织结构较DM组有明显改善。 4．各组大鼠睾丸PCNA表达的情况 与NC组相比，DM组精原细胞的PCNA表达减弱，DT组精原细胞的PCNA表达 较DM组明显增加。同时Western blot结果显示嘲组PCNA较NC组明显减少 (PO．01)，且DT组PCNA较DM组显著增加(PO．01)。 5．各组大鼠睾丸氧化应激指标MDA、SOD的情况 与NC组相比，HF组和DM组大鼠SOD水平均显著降低(PO．05，PO．01)、MDA 水平均显著增高(PO．05，PO．01)；与DM组大鼠相比，DT组SOD活性显著增高 (PO．05)，MDA水平显著下降(尸O．05)。 6．各组大鼠睾丸细胞凋亡的情况 NC组生精小管内仅见个别凋亡细胞。HF组和DM组大鼠睾丸细胞凋亡指数较 NC组均显著升高(P0．01，PO．01