焦磷酸测序法检测MEG3及GRAF基因在急性髓系白血病中的甲基化状态内科学(血液病学)专业论文.docxVIP

焦磷 焦磷酸测序法检测 MEG3 及 GRAF 基因在急性髓系白血病中的甲基化状态 广州医学院硕士学位论文 广州医学院硕士学位论文 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 中英文对照缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 AML Acute myeloid leukemia 急性髓系白血病 MEG3 Maternally expressed gene 3 母系表达基因 3 GRAF GTPase regulator associated with the focal adhesion kinase 粘着斑激酶相关性鸟 苷 三磷酸酶调节因子 SAM S．adenosylmethionine S 腺苷蛋氨酸 CGI CpG island CpG 二核苷酸岛 MSP Methylation specific PCR 甲基化特异性 PCR HSPCs Haemopoietic stem/Progenitor cells 造血干/祖细胞 dNTP Deoxyribonucleoside triphosphote 脱氧核糖核酸 DNMTs DNA methyltransferases DNA 甲基化转移酶 bp Base pair 碱基对 rpm Rotation/minute 转/分钟 min Minute 分钟 mRNA Messager RNA 信使 RNA OD Opital density 光密度 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 FAB French-American-British 法-美-英 EB Ethidium bromide 溴化乙锭 焦磷酸测序法检测 MEG3 及 GRAF 基因在急性髓 系白血病中的甲基化状态 硕士研究生：王艳茹 导 师：毛平 教授 广州医学院附属广州市第一人民医院血液内科 中文摘要 研究背景 DNA甲基化通过调控基因表达，影响细胞生物学的行为，是表观遗传学研究 的一个重要方面。肿瘤细胞存在全基因组普遍低甲基化及局部(启动子CpG 岛)高甲基化，尤其是抑癌基因的高甲基化导致的基因表达的失活是肿瘤发 生的一个重要因素。近年来也有许多关于急性髓系白血病的形成与表观遗传 学的研究，尤其是与DNA甲基化之间关系的研究。对特殊基因的甲基化研究， 可能会发现一种新的与疾病的诊断、治疗相关的生物标志物。焦磷酸测序技 术是一种新的基于DNA序列分析的技术，可以同时检测多个甲基化位点，可 以对甲基化程度进行精确定量。目前国内关于焦磷酸测序技术的报道较少。 有研究指出MEG3基因及GRAF基因的异常甲基化可能与急性白血病的发生发 展有关。我们旨在建立一种新的定量检测方法——焦磷酸测序法检测MEG3 基因及GRAF基因在急性髓系白血病中的甲基化状态，及其临床意义。 第一部分：焦磷酸测序法检测 MEG3 基因在急性髓系白血病中的 甲基化状态及其临床意义 目的 应用焦磷酸测序法检测 MEG3 基因的启动子区在急性髓系白血病 （AML） 患者骨髓细胞中的甲基化状态,并探讨其在 AML 中的临床意义。 方法 以 54 例初诊 AML 患者骨髓细胞标本为研究对象，11 例缺铁性贫血 患者骨髓细胞标本、10 例健康人外周血标本为对照。另收集 10 对 AML 患 者治疗前后骨髓细胞标本为研究对象。常规提取 DNA 并用亚硫酸氢盐处理。 然后用 PCR 扩增目标序列，采用焦磷酸测序法检测 MEG3 基因甲基化状态。 结果 1.MEG3 基因的高甲基化状态与 AML 患者的年龄、性别、白细胞总数、 血红蛋白量、血小板计数等指标及临床分型间均未发现显著相关性。2.AML 患者低甲基化的例数为 5，高甲基化的例数为 49，高甲基化的比例为 49/54(90.7%)；缺铁性贫血患者对照组低甲基化的例数为 6，高甲基化的例 数为 5，高甲基化的比例为 5/11(45.5%)；而在正常人对照组低甲基化的例 数为 10，无高甲基化的例数，高甲基化的比例为 0(0%)；AML 患者甲基化状 态明显高于另外两组，差异具有统计学意义，缺铁性贫血患者对照组与正常 人对照组之间并无统计学差异。3.AML 患者治疗前甲基化状态高于治疗后， 差异具有统计学意义。结论 MEG3 基因启动子区的异常甲基化与急性髓系 白血病的发生有关，对诊断、评价 AML 有一定意义。 第二部分：焦磷酸测序法检测 GRAF 基因在急性髓系白血病中的 甲基化状态及其临床意义 目的 应用焦磷酸测序法检测 GRAF 基因的启动子区在急性髓系白血病 （AML） 患者骨髓细胞中的甲基化状态,并探讨其在 AML 中的临床意义。 方法 以 60 例初诊 AML 患者骨髓细胞标本为研究对象，10 例缺铁性贫血 患者骨髓细