胶质细胞adam10基因敲除与脑出血的关系研究-神经病学专业论文.docxVIP

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独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师的指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。据我所知,除文中已标明引用的内容外,本论文不包含任何其他 人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体, 均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名: 日期:2010 年 4 月 16 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和 借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本论文属于 保密□,在 年解密后适用本授权数。 不保密□√ (请在以上方框内打“√” ) 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期:2010 年 4 月 24 日 日期:2010 年 4 月 24 日 华 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 前言 Adam10 分子作用的底物广泛,已证明的底物包括许多重要的信号分子比如 notch、cadherin、ephrin/Eph、L1、integrins 等,adam10 还能切割 APP,减少 A β的生成。Adam10 基因在 CNS 中广泛表达。而 Adam10 基因敲除鼠表现出心血 管系统和神经系统的发育异常,其发育异常被认为是 adam10 影响 notch 信号通 路的结果。但是 adam10 基因敲除鼠在胚胎早期(E9.5)的死亡阻止了我们进一步 研究它在神经系统中的功能。 条件性基因敲除技术(cre-loxp 系统)是近期基因敲除技术的一大进步,它能 通过对细胞特异性 cre 启动子的选择实现对特定类型细胞基因的选择性敲除,对 研究基因与疾病,基因与发育提供了很大便利。星形胶质细胞是哺乳动物神经系 统内非常重要的细胞,放射状胶质细胞(radial glial cells, RGCs)是神经系统发育过 程中非常重要的前体细胞,它们都表达 gfap(啮齿类动物放射状胶质细胞虽不表 达 gfap,但是 hGFAP 启动子在放射状胶质细胞具有活性)。我们通过 cre-loxp 转基 因鼠实现特异性敲除胶质细胞(包括 RGCs)的 adam10 基因。由于仅选择性敲除胶 质细胞的 adam10 基因,神经系统外的心血管系统不再受累,小鼠的存活期明显 延长。这为我们研究 adam10 基因在神经系统中的作用提供了前提。通过选择性 敲除胶质细胞的 adam10 基因,研究 adam10 基因在脑血管系统和神经系统中的 功能,研究胶质细胞和其它细胞的相互作用是本研究的目的。下面对 adams 家族、 adams 与神经系统的关系、adam10 的作用底物作一简要介绍。 1.1 Adams 家族 Adams 因其分子结构上有解聚素(distintegrin)和金属蛋白酶(metalloprotease) 二个重要功能的结构域而命名。图 1.1.1 是典型的 adam 分子结构示意图。 图 1.1.1 Adams 分子结构示意图 Adams 分子含有基质金属蛋白酶结构域 (metalloprotease domain, MP),解聚素结构域(disintegrin domain,DI),半胱氨酸 富集区(cysteine-rich domain,CR),类表皮生长因子序列(EGF-like sequence,E), 跨膜区(transmembrane domain,T)以及胞浆区(cytoplasmic tail,C)。其中 MP 和 DI 结构域对 adams 的功能有着非常重要的作用。(Yang P,et al.2006) 到目前为止,哺乳动物中一共发现了 33 个 Adams 家族成员,其中有 17 个 在 CNS 中表达。共有 14 个 adams 基因敲除鼠被制作出来,其中发现有四个 adams 成员(adam10,adam11,adam22,adam23)在神经系统发育中起到非常重要作 用,表现为敲除这些基因后出现神经系统发育异常或和神经系统相关的症状[1]。 Adams 分子的基质金属蛋白酶结构域能切割很多底物,发挥不同的生特学效 应。Notch 信号通路在激活过程中依赖于 adam10 基质金属蛋白酶对 notch 受体的 切割[2]。Adam10 还能通过对 N-cadherin 和 E-cadherin 的切割介导细胞的粘附和 迁移[3,4]。神经系统粘附因子 L1 也被 adam10 所切割释放,促进细胞迁移[5]。另 外 EGF 配体 pro-HB-EGF 也被 adam

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