浙江工业大学生物化学实验对啤酒酵母的蔗糖酶的提取提纯及测定研究.docxVIP

浙江工业大学生物与环境工程学院 生物化学实验论文 姓 名： 组 员： 学 品科学与工程 号： 学 科：食 所在院系：生物与环境工程学院 指导教师： 邱乐泉 2012年12月1日填 啤酒酵母蔗糖酶的提取、提纯及测定研究论文 摘要： 为了解酶的初步提取及纯化方法，并在此基础上掌握测定酶活力的原理和方法； 用Folin■酚试剂、微量凯式定氮法测定蛋白质含量的原理和方法，SDS测定 蛋白质的相对分子质量。除此之外，还要掌握高速离心机、Q?Sepharose柱层析 法、紫外分光光度计、凯氏定氮仪、蒸镭装置、电泳等用法。 这一系列实验需要实验预制作一一酵母的自溶，大约3天以后，酵母细胞壁破裂, 胞液流出，经多次分别离心得到初提液A、热提液B和乙醇提取液C。利用 Q-Sepharose柱层析法洗脱乙醇提取液C得到洗脱液D并在280nm处测D的吸光 值，用葡萄糖测验试纸定性进行酶活力测试，发现洗穿透峰得到的第1、2管酶 活力高，从第3管以后吸光值开始下降，且吸光值大的酶活力较大。得到4种酶 提取液样品以后，便可以制作葡萄糖标准曲线，进行定量酶活力测定，葡萄糖标 准曲线是一条直线，根据曲线回归方程计算4个样品的总活力单位数和酶凹收 率，比较计算结果可以知道随着蔗糖酶的不断提纯酶的总活力单位数和酶回收率 都减少。随后用Folin酚试剂法测样品中蛋白质的含量，与用微量凯氏定氮法测 定的结果进行比较，后者测出的总蛋口含量比前者大，并且知道随着酶的提纯， A、B、C、D4个样品的纯化系数升高，比活力升高，总酶活、总蛋白和蛋白回收 率却在下降，其中A的蛋白质含量最高，D的纯化程度最高。最后用SDS?聚丙烯 胺凝胶电泳法通过凝胶对样品的筛选分离、考马斯亮蓝的染色、洗脱等步骤测量 蛋白质分子和染料的迁移距离间接测定蔗糖酶的相对分子质量，得到2条蔗糖酶 条带，计算的蔗糖酶相对分子质量。 关键词：蔗糖酶；提取纯化；酶活力测定；Folin-酚试剂；微量凯式定氮法；SDS- 聚丙烯胺凝胶 Summary： To un dersta nd the the en zymes preliminary extract io n and purificati on methods, and on this basis to master the prin ciples and methods of determi nation of en zyme activity; Foli phe nol reage nt, trace Kay cerem ony will be the prin ciples and methods of nitroge n determi nation of the protein content, SDS ?PAGE protein determi nation of therelative molecular mass? In addition, we must master the use of high-speed centr讦uges, Q-Sepharose column chromatography, UV spectrophotometer, Kjeldahl instrument, distillation apparatus, electrophoresis? This series of experiments requires experimental pre-production ? yeast autolysis, about three days later, the yeast cell wall rupture, cytosolic outflow to the beginning of extracts A, after repeatedly respectively centrifugal heat extracts B and ethanol extract C. Using Q-Sepharose column chromatography to obtain an eluate D eluted ethanol extract C and the absorbanee value of the 280nm measured at D, the enzyme activity test, and found to penetrate wash peak obtained with glucose tests strips qualitative 1,2 tube enzyme activity began to decrease from the absorbance values after 3 and