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A对高血压大鼠左心室肌肾素一血管紧张素 系统不同成分表达量影响 丹参酮IIA对 高血压大鼠左心室肌肾素一血管紧张素系统不同成分表达量影响 ［摘要］目的：探讨丹参酮IIA （Tan）对肾性高血压 大鼠肥厚左心室肌中肾素-血管紧张素系统（RAS）不同成分 表达的影响。方法：建立大鼠两肾一夹型肾血管性高血压模 型。实验中，所有大鼠在手术前即被随机分为4组（n=15）： 假手术（Sham）组、高血压模型（Model）组、丹参酮IIA低、 高剂量组。给药组于肾动脉缩窄术后第5周开始分别给予丹 参酮IIA 35, 70 mg ? kg-1 ? d-lo术后每周采用标准尾套法 检测大鼠血压。给药8周后处死大鼠，分离左心室，用于检 测左心室重/体重、心肌胶原含量、心肌RAS不同成分表达 量，包括血管紧张素转换酶（ACE）、血管紧张素转换酶2 （ACE2）、血管紧张素1型受体（AT1R）和Mas受体的mRNA 表达量，以及心肌血管紧张素II （Angll）.血管紧张素（1-7） ［Ang （1-7）］含量。结果：与假手术组相比，高血压模型组 大鼠肥厚左心室中AngII, Ang （1-7）含量（P 2.3心 肌胶原含量检测 由于胶原蛋白中務脯氨酸的含量较为固 定，约为13. 4%,因而组织中胶原蛋白含量通常是通过检测 其中軽脯氨酸的含量，此数值乘以7. 46来计算的［8］。本研 究中，释脯氨酸含量的检测参照试剂盒说明操作。称取100 mg 心肌组织匀浆，加至6 mol ? L-1盐酸中经120 °C酸解6 h, 用 NaOH 调节 pH 至 7. 0。3 500 r ? min-1 离心 10 mino 取部 分上清液做检测，按照试剂盒说明操作。最后在UV-754型 分光光度计558 nm处比色测定。测定时，同时设定测定管、 标准管和空白管，蒸馆水调零，测定各管吸光度。按照试剂 盒说明所列公式计算心肌軽脯氨酸含量，换算成每克心肌组 织的務脯氨酸含量，此数值乘以7.46即得心肌胶原含量 (mg ? g-l)o 2. 4心肌Ang II, Ang (1-7)含量检测取心肌100 mg 研磨、加PBS匀浆，3 000 r ? min-1离心15 mino取上清 液，于-80 °C保存待测。ELISA检测AngII, Ang (1-7)水 平，操作严格按照试剂盒的要求进行。 2. 5心肌RAS成分mRNA表达量检测 采用RT-PCR法检 测心肌组织ACE, AT1R, ACE2, Mas受体mRNA表达量。采用 Trizol法提取心肌组织总RNA,以总RNA为模板逆转录合成 互补的cDNAo最后，以cDNA为模板，加入特异引物、PCR 反应缓冲液等，构成PCR反应体系，在下述反应温度条件下 PCR扩增目的基因序列。各目的基因的引物见表lo PCR扩增 条件为：94 °C 3 min； 94 °C 30 s, 58?62 °C 30 s, 72 °C 45 s, 35个循环。扩增反应在BioRAD iCycler iQ型定量 PCR仪(Bio-Rad Laboratories,美国)中进行。扩增产物 经琼脂糖凝胶电泳，电泳条带被扫描并储存为t辻f图片。 采用Image J (NIH, Bethesda,美国)软件，对电泳条带 的吸光度值进行检测分析。GAPDH为内参照基因，以目的基 因表达量/GAPDH表达量为目的基因的相对表达量。每组实验 重复3次。 2. 6统计学分析 全部数据以土s表示，应用SPSS 12. 0 软件作单因素方差分析，P 本研究结果显示，高血压 大鼠肥厚心肌中促高血压的经典RAS成分(ACE,AngII,ATlR) 以及新的抗高血压RAS成分［ACE2, Ang(l-7), Mas］的mRNA 表达量均明显增加。那么，在经典促高血压RAS成分与新的 抗高血压RAS成分之间，究竟是谁在高血压大鼠心脏中发挥 着主要作用呢？通过对Ang (1-7) /AngII和ACE2/ACE的计 算，发现高血压组大鼠心肌的Ang (1-7) /AngII和ACE2/ACE 均低于假手术组。这提示，在高血压大鼠心脏中新的抗高血 压RAS成分处于相对表达不足的状态，这可能导致高血压大 鼠心脏中主要表现为促高血压RAS成分过度激活的作用，即 心肌肥厚和胶原堆积。而应用丹参酮IIA治疗，虽然未能降 低高血压，但在抑制心肌肥厚和胶原堆积的同时，既降低心 肌中促高血压RAS成分(ACE, AngII, AT1R)的表达，又进 一步增强抗高血压RAS成分［ACE2, Ang (1-7), Mas］的表达。 尽管血液循环中RAS成分也有可能促进心肌肥厚的发生，但 是现有研究显示心脏局部产生的RAS成分在高血压心脏肥厚 中起着更为重要的作用[15]。据此推测，丹参