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乙型肝炎患者病毒复制检测和研究 【摘要】目的分析乙肝病毒复制检测方法，为乙肝 病程评价及抗病毒疗效的观察提供依据。方法：用免疫发光 法检测乙肝三系；用荧光定量PCR检测HBV DNA； ELISA法 检测LHBs和Pre S1；用基因芯片进行基因分型，S基因序 列同源性测序复核优势基因型。结果：pre-Sl检出率为 49. 19%； LHBs 检出率为 87. 10%,经统计 LHBs、HBV DNA 与 pre-S 1有统计学意义差异（P 图1基因芯片HBV基因 分型胶片示意图 2结果 2. 1HBV基因型检出情况 从100例患者血清样品中检出 B型、C型、BC混合型、BCD混合型4个HEV基因型，有4 例患者血清样品未能分型，分型率达96.0%,其中B型36例, 占36. 0%, C型47例，占47. 0%, BC混合型11例，占11.0%, BCD混合型2例，占2. 0%, HBV基因分型各型阳性检测结果 见图2。 图2 100例患者HBV基因型型别 B C BC BC D 2.2基因型复核B、C基因型复核为确定基因芯片法分 型的可靠性，7份送上海基康生物技术有限公司进行HBV S 区基因测序分型的复核结果与基因芯片法完全一致，仍为4 例C基因型的比对结果达99. 0%, 3例B基因型的比对结果 达99. 3%,见图3。 图3 HBV S基因序列同源性分析结果 C型B型 2.3病人临床类别与HBV基因型按肝炎临床分类标准 100例HBV患者可为急性肝炎、慢性肝炎轻度、慢性肝炎中 重度、重型肝炎、原发性肝癌等5个组，其基因型构成见表 lo基因型以B型和C型为主，重型肝炎和原发性肝癌组C 型的检出率高于其它组。 2.4 HBV DNA、肝功能水平与B、C基因型，83例B、 C基因型与HBVDNA、肝功能结果见表2。2组基因型与乙肝 检测项目经统计学处理无显著性差异(x2=0.236, P0. 05) 2.5乙肝大蛋白(LHBs)检测 2. 5. 1病人中LHBs检出情况对124例慢性乙型病毒性 肝炎病人标本进行LHBs,中检出LHBs阳性108份，阳性率 为87. 10%,其中HBV标志物模式为HBsAg. HBeAg、抗HBc 的96标本中检出LHBs阳性的90份，阳性率为93?75%,HBsAg、 抗HBe、抗HBc阳性的28份标本中检出LHBs阳性18份，阳 性率为64. 29%O 30份非乙肝病人的血液标本LHBs检测均为 阴性结果。 2. 5.2 IIBV标志物、HBV DNA与LHBs检出比较96份 HBsAg、HBeAg.抗-HBc阳性标本中，HBV DNA与LHBs检出 率分别为 97.91%和 93.75%； 28 份 HBsAg、抗-HBe、抗_HBc 阳性标本中，HBV DNA与LHBs检出率分别为57. 14%和64. 29%, 不同HBV M模式的HBV DNA与LHBs的检出率见表3,经统 计两者无统计学意义差异（x2=1.82, P0. 05）o 注：30份非乙肝病人的血液标本LHBs和HBV DNA测定 均为阴性，表3 HBV DNA拷贝数与LHBs结果110份HBVDNA 阳性标本中，其HBV DNA拷贝数存在差别，说明HBV复制存 在高低，不同HBV DNA拷贝数与LHBs的检出率比较见表4, 两方法的符合率达96. 36%o 2. 6. 1检出情况 从124例慢性乙型病毒性肝炎病人血清 标本中检出LHBs与pre-S 1阳性的分别为108份和61份， 阳性率分别为87. 10%和49. 19%o 30份非乙肝病人的血液标 本LHBs和pre-S 1检测均为阴性结果。 2. 6.2 HBV 标志物、HBV DNA、LHBs 与 pre-Sl 比较 96 份HBV标志物模式为HBsAg、HBeAg、抗HBc的标本中检出 LHBs阳性的90份，pre-Sl阳性55份，阳性率分别为93。 75%和57. 29%, 28份HBV标志物模式为HBsAg.抗HBe、抗 HBc阳性的标本中检出LHBs阳性18份，pre-Sl阳性6份， 阳性率分别为64. 29%和21.43%,以实时荧光定量PCR法检 测HBV DNA为对照，结果见表5,经统计学分析LHBs与HBV DNA检测结果无显著性差异（x 2二0.644, P0. 05）, pre-Sl 检出结果与LHBs与HBV DNA有显著性差异（x 2=41. 033和 38. 667, PO. 05）o说明LHBs法具有较好的敏感性、特异性 和较高的检出率。当血中HBV高浓度时，与定量PCR的一致 度达100%, HBV DNA的拷贝数与LHBs的阳性率呈正比，两 者具有良好的相关性，提示我们LHBs在评估HBV的复制意 义上与检测HBV-DNA相同