腹腔镜与传统开腹手术在直肠癌根治术中对肿瘤转移影响的对比性研究.docxVIP

腹腔镜与传统开腹手术在直肠癌根治术中 对肿瘤转移影响的对比性研究 【摘 要】目的：联合研究结直肠癌外周血及腹腔灌洗液 细胞角蛋白(Cytekeratin20) CK20的变化，探讨腹腔镜手 术在结直肠癌手术治疗中的应用价值。方法：应用反转录聚 合酶连(RT—PCR)法检测51例行根治术的结直肠癌患者的 外周血及及腹腔灌洗液CK20的变化。结果：在结直肠癌根 治术中，腹腔镜与开腹手术，手术前后右颈内静脉血及腹腔 灌洗液检测CK20阳性表达率变化(P0.05)均无显著性差 异，与TNM分期有显著相关。结论：腹腔镜直肠癌根治术不 增加肿瘤扩散风险。 【关键词】结直肠癌根治；CK20；腹腔镜手术；开腹手 术 【中图分类号】R735【文献标识码】A【文章编号】 1004-7484 (2013) 10-0116-02 结直肠癌的发病率逐年上升，占全球恶性肿瘤的第三 位，在我国为第四位。通过手术、化疗、放疗等其他综合治 疗有一定疗效。约有40?50%的患者仍在5年内死于复发和 远处转移。有学者认为：自原发肿瘤上脱落进入微细脉管循 环的癌细胞是引起肿瘤转移的主要因素。在临床实际操作 中，对于开腹手术难免存在对肿瘤的挤压，同时，目前的动 物实验证明，在腹腔镜操作中气腹对肿瘤转移的影响，鉴于 目前腹腔镜手术的蓬勃发展,其创伤小，术野暴露好 目前腹腔镜手术的蓬勃发展, 其创伤小， 术野暴露好, 切口 ?痕小，术后恢复时间短的优点弥补了开腹手术的不足。因 此，对于直肠癌根治术所采用以上两种方式对于肿瘤转移的 影响研究有着重要意义。CK20具备独特的分布特点和表达模 式[1],被认为是检测结直肠癌微转移灶的良好指标之一。 本实验通过检测结直肠癌不同手术前后的静脉血及腹腔灌 洗液中的CK20,结直肠癌根治术游离癌细胞(free cancer cell FCC)与肿瘤分化程度、肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤 位置等之间的关系。并进一步探讨腹腔镜手术对结直肠癌微 转移的影响。 1资料与方法 1.1临床资料 回顾性分析2008?2013年我院收治的51例结直肠癌患 者，结合患者意愿非随机选择手术方式，其中21例行腹腔 镜手术，30例同期行开腹手术。两组病例资料无明显差异。 入组标准：术前经肠镜及活检病理检查证实为结直肠癌，术 前检查(腹部彩超、CT未发现临近器官及远处转移)，均无 肠梗阻及腹部手术史，术前评估均能行根治术病例。腹腔镜 组由操作经验丰富的医师手术，无一例中转开腹。两组围手 术期处理无差异。均接受全肠道准备，全麻下手术。 1. 2标本采集 术前右颈内静脉置管，从静脉导管抽10ml静脉血，再 抽第二个静脉血，肝素抗凝。第一个10ml回推。手术结束 时同样方法采集标本。同时收集开腹后（或建立气腹后）和 关腹前两次腹腔灌洗液，均于腹腔注入200ml生理盐水，轻 轻搅动后于盆腔吸取50mlo 1.3实验方法 1. 3. 1总RNA提取 所取标本均采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离 单核细胞。总RNA提取采用Trizol法（北京博大泰克生物 基因技术有限公司），操作步骤按照其说明书进行。 1.3.2 PT-PCR 上海生工生物工程技术服务有限公司合成引物序列。 CK20 mRNA 引物: A , 5 ， -CAGACACACGGTGAACTATGG-3 ， ； B , 5 ， -GATCAGCTTCCACTGTTAGACG-3，； 内对照B-action的引物碱基序列： 5’ -ATCTGGCACCACACCTTCTACAATGAGCTGCG-3,； 5， -CGTCATACTCCTGCTTGCTGATCCACATCTGC-3， 按PT-PCR试剂盒（北京博大泰克生物基因技术有限公 司）说明，在反应系统中加入总RNA 2微克置于42￡孵育 120分钟，959条件热浴5分钟。将RNA反转录成cDNA。PCR 反应条件按 94°C 50s ； 65°C 50s； 72°C 60s 循环 32 次， 最后72°C延伸8mino 1. 3. 3结果分析 PCR及B-action扩增后产物，经含EB染色剂的2%琼脂 糖凝胶电泳，通过凝胶成像分析系统照相并对图像进行分 析，得出CK20表达的阳性率情况，并与临床常规病理结果 比较，进行统计学分析。 1.4统计学分析 所有数据均采用SPSS1O. 0软件采用x2检验进行统计学 分析，P0. 05）无显著性差异。 分别对临床病例资料进行两种手术方式对比分析，腹腔 镜组与开腹组术前、术后CK20阳性表达率在性别、TNM分期、 淋巴结转移、肿瘤分化程度和肿瘤位置等均无显著性差异。 同时在研究中发现，在51例结直肠癌病例中，CK20阳 性表达率与TNM分期和淋巴结转移有关（P0. 05）无显著性 差异，这可能因本研究标本量过少而造