HIV疫苗的实验室研究现状.doc

PAGE PAGE 1 HIV疫苗的实验室研究现状 张峰（综述）王佑春（审校）中华医学实践杂志2005年7月第4卷第7期 　　人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus，HIV）发现20余年间，已造成全球累计6000余万人感染，2000余万人死于AIDS（AcquiredImmunodeficiencySyn-drome）。目前用于治疗HIV感染的药物只能控制病毒复制，不能彻底清除病毒，而且抗HIV药物价格昂贵，具有较严重的副作用，药物使用不当，也会诱发耐药株的产生。因此，研制安全、有效的疫苗是控制HIV传播的重要手段之一。目前国内外投入了大量资金开展HIV疫苗的研究，其中包括采用传统疫苗技术研制的减毒活疫苗和灭活疫苗以及采用现代生物技术研制的重组蛋白疫苗、DNA疫苗、病毒载体疫苗等，有些疫苗已完成了Ⅲ期临床研究，有些正在进行Ⅰ或Ⅱ期临床研究，但大部分仍处在实验室研究阶段。本文对HIV疫苗的实验室研究进展综述如下。 　　1减毒活疫苗 　　到目前为止，进行过动物实验的免疫缺陷病毒疫苗中，减毒活疫苗的保护效果是最好的。早期对SIV的减毒集中于nef基因的部分或全部删除，Deniel等首先发现使用nef基因缺失的SIV减毒株免疫恒河猴，在随后1000倍恒河猴感染剂量的野毒株攻毒后，不能检测到感染［1］。减毒SIV疫苗还具有一定程度的交叉保护能力。但经过长期观察，SIV减毒活疫苗的安全问题也凸现了出来，使用nef基因缺失4个氨基酸的减毒株SIVmacC8免疫猕猴，免疫后17周，试验动物全部感染减毒株，并发展为AIDS样症状，分析病毒基因发现nef基因修复了12个核苷酸的缺失［2］。研究者删除vpr基因（SIVΔ2）［3］使其减毒，但减毒后病毒复制能力下降，由于减毒株的复制能力与免疫反应强度正相关，因此删除U3区负调控元件，在保证病毒减毒程度不变的情况下以补偿减毒株的复制能力（SIVΔ3）。对用SIVΔnef和SIVΔ3免疫的猴子进行攻毒，以CD4+T淋巴细胞数和病毒载量为指标，SIVΔ3的保护效果要好于SIVΔnef，但经过7年的观察，发现SIVΔ3仍具有恢复致病性的能力［4］。因此，HIV-1减毒活疫苗的安全性问题制约了它的发展，在没有解决之前，研究和优化其免疫效果价值不大。 　　2灭活疫苗 　　Murphey-corb等使用福尔马林灭活的SIV病毒免疫9只猕猴，在10倍SID50（50%SimianInfectiousDose）剂量灭活病毒原始株攻毒中，全部免于感染。但当使用其它毒株攻击时，几乎没有保护效果，分析表明保护作用与抗体反应有关［5］。许多研究人员指出在以上实验中使用的灭活病毒和攻击病毒为在人T细胞中培养的SIV，保护作用可能与人源HLAⅠ类分子诱发的抗体有关［6］。Sutjipto等用猴源T细胞培养的SIV灭活疫苗进行免疫，对照组4只猕猴攻毒后3～9个月全部死亡，免疫组4只猕猴全部感染，到11个月观察终点为止也有一只死亡，但免疫组的病情进展比对照组明显减慢，这种情况与中和抗体有关［7］。使用灭活疫苗在HIV-1感染者中进行的早期人体试验也没有取得预防感染和控制病毒复制的效果，同时由于没有确证病毒灭活完全性的手段，难以保证不会发生由于病毒灭活不完全而导致感染的情况，灭活疫苗的研究受到了很大的限制。 　　3蛋白疫苗 　　蛋白疫苗主要针对体液免疫反应，几乎所有的HIV蛋白疫苗都以HIV的膜区（env）gp160/gp120/gp41为原型衍化而来，这些蛋白疫苗所诱发的中和抗体具有很大的原始株特异性，实验中虽然能够较好地保护实验动物免受原始株感染，但是对异源毒株的攻击保护效果很差［8］。研究者对gp120/gp160进行删除可变区和糖基化位点突变的结构改造，希望能暴露更多保守的抗原表位，诱发广谱的中和抗体。对比野生型（Wt）与ΔV1～2、ΔV3、ΔV4和ΔV1～3改造的gp120DH12，虽然都能诱发特异性抗体，对原始株中和活性最强的是Wt，其次是Δ4和Δ1～2，但对异源HIV都没有中和活性;Δ3和Δ1～3诱发的抗体没有任何中和活性［9］。gp120含有24个左右的糖基化位点，在三聚体中，寡糖链覆盖了大部分由高变区组成的表面。将SIVmac239gp120V1环上三个糖基化位点移除，感染动物血清表现出很高的针对SIVmac239的中和活性，对异源毒株SIVmac251和SIVE660，表现中度中和活性［10］。将对SIV改造成功的经验应用于HIV-1却没有获得预期的效果，在gp120DH1210个不同区域分别移除2～7个糖基化位点，免疫动物后对血清进行中和活性分析，结果表明突变gp120诱发的抗体在中和活性和中和谱系上都没有明显提高［11］。使用单体gp120/gp160诱发的抗体多为