小麦黄花叶病毒单克隆抗体的制备及ACP-ELISA检测方法的建立.pdfVIP

江苏农业学报(ＪｉａｎｇｓｕＪ.ｏｆ Ａｇｒ.Ｓｃｉ.)，２０１８，３４(１):３４~４０ ３４ ｈｔｔｐ:/ / ｗｗｗ.ｊｓｎｙｘｂ.ｃｏｍ 任春梅，杨 柳，缪 倩，等. 小麦黄花叶病毒单克隆抗体的制备及 ＡＣＰ-ＥＬＩＳＡ检测方法的建立[Ｊ].江苏农业学报，２０１８，３４ (１):３４-４０. ｄｏｉ:１０.３９６９/ ｊ.ｉｓｓｎ.１０００-４４４０.２０１８.０１.００５ 小麦黄花叶病毒单克隆抗体的制备及 ＡＣＰ-ＥＬＩＳＡ 检测方法的建立 任春梅， 杨 柳， 缪 倩， 程兆榜 (江苏省农业科学院植物保护研究所，江苏 南京 ２１００１４) 摘要: 为建立简便、有效、低成本小麦黄花叶病毒(ＷＹＭＶ)的检测方法，用提纯的ＷＹＭＶ免疫ＢＡＬＢ/ ｃ小鼠 后，利用杂交瘤细胞技术经细胞融合、筛选和克隆，共获得２Ｄ４、２Ｄ３和６Ｆ４ ３株能稳定传代并分泌抗ＷＹＭＶ单克 －６ －７ 隆抗体的杂交瘤细胞，并分别注射小鼠腹腔制备其单抗腹水。 ３株单抗腹水的间接 ＥＬＩＳＡ 效价为 １０ ~１０ ，抗体 类型及亚类均为ＩｇＧ１、κ链。 特异性检测结果表明６Ｆ４和２Ｄ４这２株单抗仅与ＷＹＭＶ 的３２ｋＤ外壳蛋白有特异性 免疫反应。 利用效价最高的２Ｄ４单抗建立了检测ＷＹＭＶ 的抗原包被ＥＬＩＳＡ方法(ＡＣＰ-ＥＬＩＳＡ)，其灵敏度分析结 果表明，当病叶以１∶ ２５ ６００ (ｇ/ ｍｌ)倍稀释时仍能检测到病毒，特异性分析结果表明可有效区分小麦易感染的中国 小麦花叶病毒(ＣＷＭＶ)。 田间样品检测结果表明该方法可准确、可靠地用于小麦ＷＹＭＶ 的大规模检测。 关键词: 小麦黄花叶病毒； 单克隆抗体； ＡＣＰ-ＥＬＩＳＡ 中图分类号: Ｓ４３５.１２１ 文献标识码: Ａ 文章编号: １０００-４４４０(２０１８)０１-００３４-０７ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｗｈｅａｔ ｙｅｌｌｏｗ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ ＡＣＰ-ＥＬＩＳＡ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｒｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ＲＥＮ Ｃｈｕｎ-ｍｅｉ， ＹＡＮＧ Ｌｉｕ， ＭＩＡＯ Ｑｉａｎ， ＣＨＥＮＧＺｈａｏ-ｂａｎｇ (Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＪｉａｎｇｓｕＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００１４，Ｃｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ｓｉｍｐｌｅ，ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｌｏｗ-ｃｏｓｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｗｈｅａｔ ｙｅｌｌｏｗ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ (ＷＹＭＶ)， ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ＷＹＭＶ ｖｉｒｕｓ ｐａｒｔｉｃｌｅｓｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ａｎ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ，ａｆｔｅｒ ｆｕｓｉｏｎｅｄ，ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｃｌｏｎｅｄ，ｔｈｒｅｅ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ (２Ｄ４，２Ｄ３ ａｎｄ ６Ｆ４) ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ (ＭＡｂｓ) ａｇａｉｎｓｔ ＷＹＭＶｗｅｒｅｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｆｕｓｉｎｇ ｍｏｕｓｅｍｙｅ- ｌｏｍａ ｃｅｌｌｓｗｉｔｈ ｓｐｌｅｅｎ ｃｅｌｌｓｆｒｏｍ ＢＡＬＢ/ ｃ，ａｎｄ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙ ｉｎｔｏ ＢＡＬＢ/ ｃ ｍｉｃｅ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ａｓｃｅｔｉｃ ｆｌｕｉｄｓ. Ｔｈｅ