乒了酸可尿亍啶-食品与发酵工业.PDF

嘧啶核苷高产菌的代谢控制育种策略 怀丽华1 陈 宁2 1(天津商学院，天津，300134)2(天津科技大学食品科学与生命工程学院，天津，300222) 摘要选育嘧啶核苷高产菌是实现发酵法生产胞苷、尿苷的前提。文中分析了枯草芽孢杆菌中嘧啶核苷的生 物合成途径及其代谢机制，提出嘧啶核苷高产菌的育种策略：以能大量积累肌苷的枯草芽孢杆菌为出发菌株，胞 苷高产菌株在遗传学上应具备CRDAE一、5FCR。、6Au’、3Dul、HAD一等遗传标记，尿苷高产菌株在遗传学上应具 备2TU‘、6AU。、UP一等遗传标记。 关键词胞苷，尿苷，育种策略 嘧啶核苷是指尿嘧啶核苷和胞嘧啶核苷，传统的 嘧啶核苷的生产方法是使用核糖核酸(RNA)经化学 方法水解，然后制备2种嘧啶核苷，这不仅需要大量 的优质RNA原料，而且2种嘌呤核苷(腺苷和鸟苷) 及两种嘧啶核苷(胞苷和尿苷)都必须平衡产销，否则 成本价会很高…。而发酵法则是借助于微生物，具 有合成自身所需核苷的能力，通过对特定微生物的诱 变处理，选育出营养缺陷型及核苷类似物抗性突变 株，以解除代谢调节中的反馈抑制和反馈阻遏，从而 能够大规模地单一地根据市场需求生产胞苷或尿苷， 降低此类药物的生产成本。此外，随着原生质体融合 育种技术和基因克隆育种技术的发展，通过改良菌种 广氨；^酸一受啪删 遗传特性，克隆结构类似物抗性基因，提高关键酶的 活性，也将提高嘧啶核苷的合成能力。 尿苷酸 I 双羟基乳清酸盐 1980年代至1990年代中期，日本科学家开始发 |_一i^酯 表发酵法生产嘧啶核苷的成果，随着抗病毒、抗肿瘤、 治疗艾滋病药物的深入研究，天然嘧啶核苷需求量将 广_氯幸酸 会越来越大，利用微生物发酵法大规模生产嘧啶核苷 ～ 7 的方法将受到重视。 乒了酸可尿亍啶0 I 11 1 枯草芽孢杆菌嘧啶核苷生物合成途径及其 萋器能卜翟萋器能卜孬 11卜填酸r填酸 代谢调节机制 胞三磷—F胞苷了尿苷 据国外研究报道，发酵法生产嘧啶核苷的菌株与 生产嘌呤核苷的菌株有许多共同特点，都要求菌株中 天然的磷酸单酯酶活力很强，因此枯草芽孢杆菌 (Bnc删“ss“6f以舔)为最佳出发菌株旧J，枯草芽孢杆菌 中嘧啶核苷生物合成途径见图1uj。 在这些参与嘧啶核苷酸代谢的酶中，氨甲酰磷酸 合成酶P是嘧啶核苷酸生物合成途径的关键酶【3J， 该酶催化从C02、NH3、ATP生物合成氨甲酰磷酸的 2 嘧啶核苷高产菌的代谢控制育种策略 第一作者：博士研究生，副教授。 2．1出发菌株的选择 收稿日期：2005—01—31，改回日期：2005—08—25 107 竺!Q曼生蔓!!鲞蔓!Q塑￡璺蔓至!生塑!l 为了获得尿苷或胞苷发酵产率高的菌株，嘧啶核 从遗传上解除正常代谢调控的理想菌株。这是因为 苷产生菌的出发菌株一定要选择嘧啶核苷酸代谢能 菌体带上代谢拮抗物抗性标记后，一个可能途径是关 力较强的菌株。按照嘧啶核苷酸生物合成代谢图判 键酶(如氨甲酰磷酸合成酶P