转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立.pdfVIP

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2019-07-29 发布于浙江
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转基因烟草中外源基因实时荧光定量PCR检测方法的建立.pdf

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南方农业学报JournalofSouthern Agriculture ISSN2095—1 NNXAAB 191；CODEN http：／／www．nfnyxb．cn 191．2015．5．745 DOI：10．3969／j：issn．2095—1 转基因烟草中外源基因实时荧光定量 PCR检测方法的建立王盛，谢芝勋+，谢丽基，谢志勤，黄莉，罗思思，邓显文，黄娇玲，刘加波 (广西兽医研究所／广西畜禽疫苗新技术重点实验室．南宁530001) 摘要：【目的】建立SYBRGreenI实时荧光定量PCR检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法，为转基因植物中 Green 外源基因拷贝数的检测提供参考。【方法】采用SYBR I实时荧光定量PCR方法，检测转基因烟草中外源绿色荧光蛋白基因(GFP)的拷贝数，以烟草单拷贝的内源核糖核酸还原酶基因(RNR2)作为内参基因，建立相对定量的双标准曲线法检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法。【结果】构建RNR2基因、饼P基因实时荧光定量PCR的标准草中Gj：隧因的拷贝数分别为5、8、19、28和45，非转基因烟草植株的GFP基因拷贝数为0。【结论】建立的转基因烟草中 Green 外源基因SYBR I实时荧光定量PCR检测方法具有简单、快速、准确等优点，可用于基因工程中对优良转化植株的筛选及外源基因表达量的快速检测和定量分析。 Green 关键词：转基因烟草；双标准曲线法；外源基因；拷贝数；SYBR I实时荧光定量PCR 中图分类号：Q786 文献标志码：A methodof in tobacco Detection exogenousgenetransgenicby emitreal-time-lanuorescencefluorcerRCP quantitative quantitative WANG Zhi-xun+，XIE Li，LUOSi—si， Sheng，XIE Li-ji，XIEZhi-qin，HUANG DENG Xian—wen，HUANGJia—bo Jiao-ling，LIU andNew Research ofAnimalVaccines (GuangxiVeterinaryInstitute／GuangxiKeyLaboratory Technology， 530001，China) Nannmg methodfor numberof SYBRGreenIreal-time PCR detectingcopy exogeno