过表达Hdac6蛋白的转基因小鼠的构建与鉴定-生物学;遗传学专业论文.docxVIP

南开大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取 得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任 何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所涉及的 研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文 原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： ．王德垄 2011年 5月 16日 非公开学位论文标注说明 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申请 和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本说明 为空白。 论文题目 申请密级 口限制(≤2年) 口秘密(≤10年) 口机密(≤20年) 保密期限 20 年 月 日至20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 限制★2年(最长2年，可少于2年) 秘密★10年(最长5年，可少于5年) 机密★20年(最长10年，可少于10年) 摘要摘要 摘要 摘要 组蛋白去乙酰化酶6(Histone deacetylase 6，HDAC6)含有两个酶催化结构 域，是HDAC家族中最为独特的一员。HDAC6可以与不同的蛋白相互作用从而 行使不同的功能。一方面，它可以使组蛋白的赖氨酸发生去乙酰化，与组蛋白乙 酰化酶(Histone acetyltransferase，HAT)一起调节组蛋白去乙酰化的水平，在染 色体结构重塑及基因表达调控的过程中起重要作用。另一方面，它可以与微管蛋 白、HSP90及Cortactin等蛋白相互作用，在细胞迁移、病毒防御、免疫突触的形 成及错误折叠蛋白的降解等活动中发挥重要功能。HDAC6所具有的这些功能常使 其与一些疾病的发生联系在一起，目前已知的有神经退行性疾病和癌症。因此， 对HDAC6基因进行深入研究不仅有利于人们弄清上述活动发生的分子机制，还 将有利于新型治疗药物的研发。 构建转基因动物是我们在研究某一基因的功能时所较为常用的一种技术手 段。在本文中，我们克隆了Hdac6基因的开放阅读框并构建了Hdac6基因的过表 达载体。通过细胞电转的方法，将此载体导入到了小鼠的胚胎干细胞中，使之与 细胞的基因组DNA发生随机整合。经过药物筛选，获得了四个过表达Hdac6蛋 白的稳定细胞系。在此基础上，利用4-8细胞阶段胚胎注射的方法，最终获得了 一只具有生殖系转移能力的嵌合体小鼠。在进一步的交配繁殖后，成功获得了8 只过表达Hdac6蛋白的转基因小鼠。 本文所建立的过表达Hdac6基因的转基因小鼠为病毒感染的防御机制的解析 提供了新的材料，也将为神经退行性疾病及癌症等疾病的治疗带来新的曙光。除 此之外，还为将来大型农业动物的基因改造打下了坚实的理论基础。 关键词：组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6) 胚胎干细胞转基因小鼠 AbstractHistone Abstract Histone deaetylase 6(HDAC6)has two catalytic domains which make it a special member of the HDAC family．HDAC6 interacts丽t11 different proteins SO as to have different functions．On one hand,it deacetylates the lysine of hinstone and regulates the acetTlation level of histones together、析也histone acetyltransferase(HAT)．On the other hand,it interacts with Tubulin，Hsp90 and Coractin,and paly important roles im many biological proc懿s锚，such as cell migarition,viral defense,immunological synapse formation,misfold protein degradation and SO On．Accordingly,it often associates with the develoment of many diseases，mcludmg neurodegenerative diseases and oancer．Further study on its function not only helps US understand the reg