基质细胞衍生因子联合外周血内皮祖细胞移植治疗裸鼠肢体缺血的实验研究-外科学(普外)专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 2 英 文 缩 略 词 表 英文缩写 SDF-1 英文名称 Stromal cell–derived factor-1 中文名称 基质细胞衍生因子-1 EPCs Endothelial progenitor cells 内皮祖细胞 DMEM VEGF Dulbeccos minimum essential medium Vascular endothelial growth factor 达尔伯克必需基本培养基 血管内皮生长因子 bFGF G-CSF Basic fibroblast growth factor Granulocyte-colony stimulating factor 碱性成纤维细胞生长因子 粒细胞集落刺激因子 rhG-CSF HFN recombinant human G-CSF Human fibronectin 重组人粒细胞集落刺激因子 人纤维连接蛋白 FITC-UEA-I Dil-acLDL FITC- Ulex Europaeus agglutinin I Dil- acetylated low-density lipoprotein FITC 标记的荆豆凝集素 Dil 标记乙酰低密度脂蛋白 FBS PBS Fetal bovine serum Phosphate buffered saline 胎牛血清 磷酸盐缓冲液 MNCs VEGFR2 Mononuclear cells Vascular endothelial growth factor 单个核细胞 血管内皮生长因子受体 2 vWF LSCM von Willebrand factor Laser scanning confocal microscope 血管性假血友病因子 激光共聚焦显微镜 基质细胞衍生因子联合外周血内皮祖细胞移植治疗裸 鼠肢体缺血的实验研究 中文摘要 目的：血管内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells，EPCs）作为能循环、增殖和 分化为成熟血管内皮细胞的一类前体细胞，它们不仅参与胚胎期的血管发育，也 存在于成体的骨髓及外周血，在成年机体血管新生中起重要作用。近年来的研究 表明 EPCs 在下肢缺血性疾病的发生、发展中扮演了重要角色，血管内皮祖细胞数 量减少预示血管内皮修复能力降低，血管疾病发生率增高。 EPCs 能在缺血局部 形成新生血管，这种治疗性血管新生(neovascularization)成为治疗肢体缺血性疾病 的研究热点，并已取得了初步成果。 骨髓基质细胞衍生因子-1 (stromal cell–derived factor-1,SDF-1) 是近年经过实验验 证的一种能够促使 EPCs 向血管损伤或组织缺血处归巢的细胞因子。其中 SDF-1α 是已知 SDF-1家族中在骨髓基质细胞、内皮细胞及造血祖细胞中连续表达的一个亚 型。 本实验通过建立裸鼠后肢缺血模型，研究机体内 SDF-1对内皮祖细胞功能的影响， 评价血管新生情况。研究 SDF-1及其拮抗剂 AMD3100对 EPCs 归巢及血管形成能 力的影响。为干细胞移植及基质细胞衍生因子治疗肢体缺血提供实验依据，同时 为增强临床干细胞移植效果提供新的途径。 方法：取经过 rhG-CSF 动员的健康成年人的外周血，密度梯度离心法提取单个核 细胞，予以分离诱导培养，使用免疫荧光的方法鉴定 EPCs。结扎裸鼠股动脉，建 立裸鼠后肢缺血模型，将裸鼠随机分为缺血对照组（A 组）、EPC 移植组（B 组）、 SDF-1局部应用组（C 组）、SDF-1联合 EPC 移植组（D 组）、SDF-1联合 AMD3100 处理后 EPC 移植组（E 组）。分别通过微量注射器于裸鼠尾静脉适量 EPCs 或等量 经含 AMD3100的培养基孵育1h 的 EPCs 悬液，裸鼠后肢腓肠肌部位使用微量注射 器注射适量 SDF-1，移植后第3、7天免疫组化法检测后肢腓肠肌 CD34+VEGFR+ 细胞数，第28天通过免疫组化标记内皮细胞表面标志Ⅷ因子，检测缺血区新生毛 细血管密度。 结果：诱导培养 7 天后的 EPCs 呈梭形或圆形；并且有放射状的细胞集落形成。 DiI-acLDL 和 FITC-UEA-1 双染色阳性，发黄色荧光。移植第 3 天和第 7 天，对照 组、EPCs 组、SDF-1 组、SDF-1+EPCs 组、SDF-1+ AMD3100 EPCs 组双阳性细胞 数分别为 0.00±0.00 个/HP、5.30±0.65 个/HP、0.00±0.00 个/HP、10.31±0.63 个/HP、 1.86±0.17 个/HP 和 0.00±0.00 个/HP、7.05±0.18 个/HP、0.00±0.00 个/HP